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第一部分雷公藤甲素对百草枯诱导的肺纤维化的治疗作用研究目的:评价雷公藤甲素对常用肺纤维化模型-百草枯诱导的肺纤维化的治疗作用。方法:本课题采用百草枯作为造模诱导剂,诱导建立了肺纤维化模型,并测定了药物对肺纤维化模型体重,肺系数及肺组织胶原含量的影响,并根据炎性细胞浸润,肺间质纤维化等程度等对肺组织切片进行评分,综合评价雷公藤甲素对肺纤维化的治疗效果,并利用免疫组化的方法研究了雷公藤甲素对EMT标志物的影响。结果:雷公藤甲素可以显著改善肺纤维模型小鼠的活动状态,肺纤维化模型小鼠的肺系数、胶原含量百分比显著下降。给药雷公藤甲素后肺组织肺纤维化程度病理学评分也显著下降。此外对TGF-β1、TNF-α、IFN-γ等在肺纤维化过程中发挥重要作用的细胞因子也有调控作用。百草枯诱导的肺纤维化程度被显著改善。雷公藤甲素可以显著降低肺纤维化模型小鼠肺组织间充质标志物Vimentin及α-SMA的表达量,提高上皮标志物的表达量,抑制肺上皮细胞的EMT过程。结论:雷公藤甲素对百草枯诱导的肺纤维化具有一定的治疗作用,并且可以抑制肺上皮细胞的EMT。第二部分雷公藤甲素治疗肺纤维化的药理机制研究目的:阐明雷公藤甲素治疗肺纤维化的分子机制,研究其对肺上皮细胞EMT的影响;寻找其作用靶点及发挥作用的下游信号通路,并进行验证。方法:本课题利用划痕实验,Transwell实验,免疫荧光等方法研究了雷公藤甲素对PQ诱导的肺上皮细胞EMT的影响;利用计算机模拟的方法预测了雷公藤甲素与可能的作用靶点TGF-β1的结合情况,并用Biacore的方法验证了二者的结合;进一步用免疫组化,western-blot等方法在细胞水平及动物水平上验证了雷公藤甲素可以抑制TGF-β1诱导的EMT,证明了雷公藤甲素靶向TGF-β1发挥抗肺纤维化的作用。结果:TPL可以显著抑制PQ诱导的肺上皮细胞的迁移和侵袭,抑制其诱导的EMT;TPL与肺纤维化诱导因子TGF-β1具有很好的结合活性;TPL可以抑制TGF-β1诱导的EMT过程,TPL通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路发挥治疗肺纤维化的作用。结论:雷公藤甲素可以通过靶向TGF-β1/Smad信号通路抑制肺上皮细胞的EMT过程,从而发挥抗肺纤维化的作用。第三部分雷公藤甲素对博莱霉素(BLM)诱导的肺纤维化的治疗作用初探目的:评价雷公藤甲素对经典的特发性肺纤维化模型-博来霉素诱导的肺纤维化小鼠模型的治疗作用。方法:本课题采用作为博来霉素作为造模诱导剂,诱导建立了特发性肺纤维化模型,并测定了药物对肺纤维化模型体重,肺系数及肺组织胶原含量的影响,并根据炎性细胞浸润,肺间质纤维化等程度等对肺组织切片进行评分,综合评价雷公藤甲素对肺纤维化的治疗效果。结果:雷公藤甲素可以显著改善肺纤维模型小鼠的活动状态,肺纤维化模型小鼠的肺系数、胶原含量百分比显著下降。给药雷公藤甲素后肺组织肺纤维化程度病理学评分也显著下降。博来霉素诱导的肺纤维化程度被显著改善。结论:雷公藤甲素对博来霉素诱导的肺纤维化具有一定的治疗作用,显著改善肺组织纤维化程度。