基于免疫磁珠和分子印迹技术建立农药西维因检测方法的研究

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西维因属于氨基甲酸酯类农药,主要用于稻谷、小麦、高粱、玉米、花生、蔬菜、果树等害虫的预防及治理。西维因属于中、低毒性农药,其防治机理是通过抑制害虫体内乙酰胆碱酯酶的活性,使乙酰胆碱在虫体组织中蓄积,干扰虫体的正常分泌系统。农产品中西维因残留对人体亦有同样作用,常导致急性毒性、免疫毒性、生殖毒性等危害,因此对其检测具有十分重要的意义。农药残留是现阶段食品安全重点检测项目之一。农药残留最主要的检测方法是仪器检测法。仪器检测法具有灵敏度高、重现性好、适用范围广、可同时进行多残留分析等优点,但仪器检测法需要复杂的样品前处理过程,检测条件要求较高,检测时间较长且需要专业人员操作。食品流通从市场到消费者速度快,范围广,仪器检测难以实现快速检测的目的。加强对农药残留快速检测新方法的研究,研制方便、快捷、易操作的检测方法势在必行。因此,本论文以免疫磁珠和分子印迹技术为基础,建立三种快速检测农药西维因的方法。主要结论如下:(1)将人工合成的西维因半抗原与牛血清白蛋白偶联形成完全抗原,采取背部皮下多点注射法免疫新西兰大耳白兔得到西维因多克隆抗体。同时采用一步水热法制备具有氨基功能团的Fe3O4磁纳米粒子。以戊二醛为交联剂偶联氨基化Fe 3O4磁纳米粒子和西维因多克隆抗体,作为捕捉器;以辣根过氧化物酶标记的西维因半抗原作为信号放大器,采用直接法通过测定吸光值实现定量检测西维因含量。在最佳条件下,西维因浓度在1×1 0-3-1 0 mg L-1范围内具有较好的线性关系,抑制率最高可达90.6%;测得的半抑制浓度(IC50)为0.0 7 7 mg L-1,检出限(IC15)为1.4 8×1 0-3mg L-1。以浓度1 mg L-1的西维因在相同条件下重复检测三次,测得的相对标准偏差为1.67%。通过一系列的分析,所建立的抗体包被免疫磁珠可以用于西维因的快速检测。(2)以纸片为载体,农药西维因为模板分子,甲基丙烯酸(MAA)为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGD M A)为交联剂,偶氮二异丁腈(AIB N)为引发剂,采用传统热聚合法在硅烷化修饰的纸片表面聚合分子印迹层,利用形成的对模板分子具有特异性识别能力的分子印迹位点作为西维因的仿生抗体,建立仿生酶联免疫法,实现定性及定量检测西维因含量。在最佳条件下,测得西维因浓度在1×10-3-1 mg L-1范围内具有较好的线性关系,抑制率最高可达6 9.8%,测得的半抑制浓度(IC50)为0.11 6 mg L-1,检出限(IC15)为2.1×10-3 mg L-1。以浓度1 mg L-1的西维因在相同条件下重复检测三次,测得的相对标准偏差为1.6 9%。通过一系列的分析,所建立的以纸片为载体的分子印迹仿生酶联免疫法可以用于西维因的快速检测。(3)以功能化离子液体1-乙烯基-3-己基咪唑六氟磷酸盐为辅助媒介,通过静电作用修饰量子点使其有效参与分子印迹聚合物的制备。以农药西维因为模板分子,MAA为功能单体,EGDM A为交联剂,AIBN为引发剂,采用传统热聚合方法制备西维因量子点-分子印迹荧光传感材料。通过吸附西维因造成量子点荧光强度变化实现定量检测西维因含量。在最佳条件下,测得西维因浓度在4.9 7×1 0-7-3.98×1 0-4moL L-1范围内荧光强度变化呈现良好的线性关系,测得的检出限为1.47×1 0-7 mo L L-1。以浓度1 0 mg L-1的西维因在相同条件下重复检测五次,测得的相对标准偏差为2.5%。同时还对其再生重复使用性进行了研究。在相同条件下重复检测三次,测得的相对标准偏差为3.8%。通过一系列的分析,所建立的量子点-分子印迹荧光传感材料可以用于西维因的快速检测。
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