研究背景人类白细胞抗原G（human leukocyte antigen,HLA-G）基因位于6号染色体短臂上的一群紧密连锁基因群,它所编码的主要组织兼容性复合物属非经典HLA-I类分子。HLA-G分子具有选择性的组织分布;有限的分子多态性;mRNA选择性剪接形成不同的异构体分子,分别编码不同的蛋白质分子亚型的特点。早期研究认为HLA-G限制性表达于正常妊娠时母胎界面的绒毛外细胞滋养细胞。现已发现HLA-G蛋白还表达于胎儿绒毛膜绒毛的血管内皮细胞、羊水、绒毛基底层的增殖性细胞滋养层细胞及胸腺上皮组织等部位。妊娠被认为是成功的同种异体移植,HLA-G在母胎界面的表达对母胎免疫耐受和维持正常妊娠有重要作用,很多妊娠相关疾病与滋养细胞异常增殖、浸润,胎盘形成不良有关。某些由于滋养细胞增殖和浸润异常有关的妊娠相关疾病与HLA-G的异常表达有关。HLA-G通过抑制妊娠期子宫蜕膜内自然杀伤细胞（dNK）和细胞毒性T细胞（CTI。）等的细胞毒作用,调节细胞因子释放的平衡,提高胚胎的卵裂速率等机制在母胎免疫耐受和胚胎分裂、着床等方面发挥着重要作用。因此HLA-G可能具有调节滋养细胞增殖、分化的功能,同时保护这些细胞免受母体免疫细胞的攻击。HLA-G的研究是一个相对较新的领域,我们的研究具有重要的理论及临床应用价值。本研究有可能发现HLA-G的新功能,对深入了解妊娠免疫耐受机制及妊娠相关疾病及病理妊娠的发病机制具有重要的意义。对辅助生殖技术的发展具有潜在的临床价值。外源和内源性双链RNA在细胞内诱导同源序列基因表达受抑制的现象称为RNA干扰（RNAinterfering,RNAi）。RNAi现象在一系列的生物中存在,包括植物、真菌、锥虫、囊虫、果蝇和线虫。在培养的哺乳动物细胞中也能观察到这一现象。小分子干扰RNA（small interfering RNAs,siRNAs）是介导RNAi反应的效应物。由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达,所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的基因治疗领域。研究目的:构建特异性针对靶基因HLA-G基因的siRNA腺病毒载体,瞬时转染人绒癌细胞株JEG-3,下调该细胞HLA-G基因表达水平。在体外建立HLA-G低表达的细胞模型。通过实验的方法检测腺病毒载体对JEG-3细胞的感染效率。然后用这个HLA-G低表达的滋养细胞模型进行功能实验,进一步探讨HLA-G对滋养细胞增殖功能的调节。研究方法:应用RNAi技术,使用高表达HLA-G的JEG-3细胞系（来源于人绒毛膜癌细胞）进行滋养细胞功能研究。构建可以转录出特异干涉HLA-G mRNA的siRNA的重组腺病毒载体来下调JEG-3细胞系HLA-G表达水平。通过腺病毒载体瞬时转染JEG-3细胞建立HLA-G低表达的滋养细胞模型。1)通过X-Gal染色实验检测重组腺病毒载体对JEG-3细胞感染效率;2)对HLA-G降调节后的滋养细胞进行非放射性细胞毒测定,检测490nm处的OD值,OD值即可代表细胞增殖的相对数量。结果:①构建了重组腺病毒载体,可以高效转染HLA-G高表达的JEG-3细胞株,在MOI 100时感染效率可达100%,并且产生明显HLA-G RNAi效果,建立HLA-G低表达的细胞模型;②对HLA-G降调节后的滋养细胞进行非放射性细胞毒测定,检测490nm处的OD值。得到转染后目的siRNA组、非特异siRNA组和空白对照组的OD₍490nm0直分别是2.368±0.187、2.681±0.163和2.725±0.237,对三个实验组进行两两比较,重组腺病毒载体转染后目的siRNA组JEG-3细胞增殖数量减少,结果具有统计学意义。结论:本实验构建特异性干扰HLA-G基因表达的腺病毒载体,并转染人类滋养细胞,建立低表达HLA-G的人滋养细胞体外研究模型。通过实验观察到HLA-G表达下调后的滋养细胞增殖受到了抑制,推测HLA-G可能对滋养细胞增殖功能有维持、促进作用。