论文部分内容阅读
本文首先对初始菌株棘孢小单孢菌进行复壮与自然分离，经过初筛、复筛及传代稳定性试验，得到高产菌株SIPI-GM.13，摇瓶发酵效价为632μg/mL，比初始菌株的庆大霉素C1a效价444μg/mL提高了1.4倍。紧接着对菌株保藏方法进行考察，并对斜面配方及培养条件进行优化，得到最终斜面配方（g/100mL）：可溶性淀粉1.5，麸皮3.0，MgSO4·7H200.05，L-天冬酰胺0.002，CaCO30.1，琼脂条2.0，pH7.0，配制水为饮用水，35℃培养7-8天，培养结束后放冰箱4℃保藏，7天后传代。 将SIPI-GM.13作为工艺优化的出发菌株，对初始的种子培养基配方、种子摇瓶培养条件，发酵培养基配方及其摇瓶培养条件进行了一系列的优化，通过试验得到了最佳的发酵培养基配方(g/100mL)：玉米淀粉4.5，玉米粉1.5，冷榨黄豆饼粉3.2，大豆蛋白胨0.8，KNO30.05，CaCO30.5，CoCl20.002，NaCl0.15, MgSO4·7H2O0.1，(NH4)2SO40.5。并确定了较优的培养条件：培养基消前pH8.2、摇瓶装液量35mL/250mL、接种量11％（4.0mL/35mL）、35℃、240rpm，培养周期为4天。最终发酵效价为1322μg/mL，比初始的发酵效价提高了2.9倍。 在对庆大霉素C1a产生菌摇瓶发酵工艺优化的同时，对发酵液的预处理方法以及HPLC检测方法进行了优化。通过大量的试验，最终确定发酵液的预处理方法为：用4mol/L硫酸调pH至1.7左右，55℃浸泡1.5h，12000rpm离心5min后取上层清液进行HPLC检测。当样品浓度较高（2～15mg/mL）且纯度较低时（40%～60%），为了使检测结果正确，衍生化试剂中的OPA含量应该增加至4g，即：邻苯二甲醛4g，溶于5mL甲醇中，加入巯基乙酸2mL，最后加0.4mol/L硼酸(45%氢氧化钠调pH值10.4)95mL混匀，45%氢氧化钠调pH10.4。