胆碱三甲胺裂解酶（CutC）是甘氨酰自由基酶（GRE）家族中的一员,广泛存在与人体肠道微生物中。CutC可在厌氧条件下将食物中的胆碱、甜菜碱等物质分解,生成三甲胺（TMA）,TMA进入到人体血液循环后会被肝脏中的黄素单加氧酶氧化为氧化三甲胺（TMAO）。TMAO可增强血液中血小板反应性和体内血栓形成可能性,从而引发心脑血管疾病。因此,CutC在心脑血管疾病的发生发展中起关键作用,对其抑制剂的研究可为心血管疾病的治疗提供新的方案。我们的研究对象是Desulfovibrio alaskensis G20来源的胆碱三甲胺裂解酶。我们首先通过分子生物学手段分别构建了pET28a-CutC、pET29b-CutD、pACYCDuet-1-isc重组表达载体,随后进行了表达纯化,获得了CutC、CutD蛋白。CutC最适诱导条件为500μM IPTG,37℃,4 h。CutD最适诱导条件为在严格的厌氧条件下500μM IPTG,16℃,14 h诱导。酶动力学参数是酶抑制剂研究中的关键参数,测定CutC动力学参数具有十分重要的意义。我们采用酶偶联分光光度分析法测定CutC动力学参数,通过测定NADH光吸收值变化,间接表示产物乙醛的生成量。我们通过以上实验成功对CutC进行了激活并构建了酶联反应活力测定方法。计算出了CutC酶动力学参数,其中K_m值为337.6μM,V_max为26.164 mM/min。酶活为4.32 U,比活力为0.491 U/mg。酶抑制剂的筛选对药物开发有重要作用,现有CutC抑制剂研究较少,抑制能力较低,因此我们拟从各类化合物库中筛选CutC抑制剂。我们采用了计算机虚拟筛选的方法,通过对MCE Fragment Library库、中药成分小分子库TCMSP化合物库以及CNS Library库共计约90 K种化合物与CutC进行分子对接,挑选出共计500余种打分函数绝对值大于5的化合物,并对比了现有的抑制剂DMB与CutC的结合情况,发现了多种小分子化合物会与CutC中的Cys489、Glu491形成氢键作用,少部分化合物还与Tyr506形成氢键作用。除此之外,这些化合物还和Tyr208、Phe395形成疏水相互作用,上述位点均是胆碱与CutC结合过程中的关键位点。另外,这些化合物与CutC的结合自由能均大于现有抑制剂DMB与CutC的结合自由能。由此我们初步得到了可能对CutC有更好抑制作用的化合物,但具体的抑制效果还需后续实验验证。