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第一部分目的:分别建立稳定表达绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)和肝细胞粘附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)蛋白的膀胱癌T24细胞株。方法:运用脂质体法分别将pEGFP-N2和pEGFP-N2-hepaCAM质粒转入膀胱癌T24细胞,经G418筛选后,应用有限稀释法建立单克隆细胞株T24/GFP和T24/hepaCAM-GFP;通过荧光显微镜下观察T24/GFP和T24/hepaCAM-GFP细胞中GFP表达,采用RT-PCR和Western blot方法检测T24/GFP和T24/hepaCAM-GFP细胞中hepaCAM mRNA、GFP和hepaCAM蛋白的表达来鉴定稳定表达的细胞株。结果:荧光显微镜观察到T24/GFP细胞和T24/hepaCAM-GFP细胞满视野的绿色荧光,同时还观察到hepaCAM蛋白在单个广泛延展细胞上,主要定位于核周区域及细胞突起表面,当细胞相互连接时,hepaCAM蛋白形成并指结构显著分布在细胞膜表面相互接触的突起上,呈现典型细胞粘附分子特性;RT-PCR方法检测到T24/hepaCAM-GFP细胞hepaCAM mRNA的高表达,Western blot方法检测到T24/GFP细胞GFP(27KDa)的表达和T24/hepaCAM-GFP细胞hepaCAM(75KDa)蛋白的表达。结论:成功建立稳定表达GFP和hepaCAM蛋白的膀胱癌T24/GFP细胞株和T24/hepaCAM-GFP细胞株,为研究hepaCAM基因对膀胱癌T24细胞体内外增殖的作用奠定基础。第二部分目的:研究hepaCAM基因对膀胱癌T24细胞体外增殖的影响。方法:将建立稳定表达GFP和hepaCAM蛋白的T24/GFP细胞株和T24/hepaCAM-GFP细胞株分别命名为空载体组和实验组,未转染的T24细胞株命名为对照组;采用MTT实验和克隆形成实验观察hepaCAM基因对T24细胞体外生长的作用;流式细胞仪检测各组细胞周期分布;RT-PCR方法检测各组细胞周期蛋白CyclinD1的mRNA表达变化。结果:MTT检测稳定表达hepaCAM蛋白的实验组细胞(T24/hepaCAM-GFP)120 h细胞增殖率为54.01±12.06 %,其增殖速度明显慢于对照组(T24)161.67±12.17%和空载体组(T24/GFP)160.63±13.95 %(P<0.01);克隆形成率结果表明:实验组克隆形成率为27.67±4.53 %,明显低于对照组88.06±7.69 %和空载体组86.83±5.89 %(P <0.01);细胞周期结果表明:实验组细胞G0/G1期比例(78.70±1.96%)明显高于对照组(61.59±2.14%)和空载体组(59.25±3.17%()P<0.05);RT-PCR方法检测出实验组CyclinD1 mRNA表达相比于对照组和空载体组明显下调(P<0.05)。结论:HepaCAM基因通过阻滞细胞于G0/G1期,减少CyclinD1 mRNA表达,抑制T24细胞的增殖。第三部分目的:研究hepaCAM基因对膀胱癌T24细胞株裸鼠移植瘤生长的影响。方法:将T24、T24/GFP和T24/hepaCAM-GFP细胞分别种植于裸鼠皮下,并分别命名为对照组、空载体组和实验组,观察各组裸鼠移植瘤生长情况。结果:实验组的裸鼠移植瘤的生长速度较对照组和空载体组缓慢,23d的瘤体体积明显小于对照组和空载体组[(0.188±0.039)cm3 vs(1.002±0.060)cm3,(0.989±0.093)cm3, P<0.01],实验组的瘤体重量明显轻于对照组和空载体组[(0.340±0.114)g vs(1.120±0.259)g,(0.880±0.239)g, P<0.01]。结论:HepaCAM基因能抑制T24细胞裸鼠移植瘤的生长。