目的:实验1:研究Sprague-Dawley(SD)大鼠脑出血(ICH)血肿周围脑组织中microRNA-133b(mi R-133b)在ICH后不同时间点的变化。实验2:收集miR-133b修饰的骨髓间充质干细胞(MSCs)分离充足含有mi R-133b的外泌体。实验3:研究外泌体作为载体将miR-133b传递到神经细胞中的方式对于ICH后脑损伤的神经保护作用,以及探讨此神经保护的可能机制。方法:实验1:选48只大鼠(一共使用50只,其中48只存活)随机分为假手术(sham)组和ICH后12h、24h、48h、72h、96h、120h、168h共8组,每组6只。全部大鼠在ICH后相应时间点均被处死。利用荧光定量PCR检测大鼠血肿周围1.5-2mm范围内脑组织中miR-133b表达水平。实验2:选取6周龄SD大鼠的胫骨和股骨部分分离MSCs,利用全骨髓差异贴壁法纯化MSCs,并培养至第6代的MSCs用于实验,把人工合成的miR-133b mimcs和miR-133b negative control转染MSCs72h,再提取外泌体,用Westenblot鉴定外泌体标志物CD9,CD63,CD81,用荧光定量PCR检测miR-133b表达;实验3:选72只大鼠(一共使用75只,其中72只存活)随机分为sham组,ICH+PBS组(0.5mlPBS,尾静脉注射),ICH+miR-con组(转染mi R-con后的100μg外泌体蛋白溶入0.5mlPBS,尾静脉注射5分钟),ICH+miR-133b组(转染miR-133b后的100μg外泌体蛋白溶入0.5mlPBS,尾静脉注射5分钟)。在ICH24h后尾静脉注射PBS,mi R-con,miR-133b,ICH后96h所有的大鼠被处死。利用荧光定量PCR检测大鼠血肿周围1.5-2mm范围内脑组织中miR-133b表达水平;每组取6只大鼠脑组织做石蜡切片进行TUNEL染色、Fluoro-Jade B(FJB)染色;每组选取6只大鼠取血肿周围1.5-2mm范围内脑组织,进行Western blot分析。结果:实验1:大鼠ICH后血肿周围脑组织中miR-133b表达下降,以ICH后72h组miR-133b表达下降最为显著(p<0.001)。我们选取ICH后24h作为miR-133b等尾静脉注射的时间点。实验2:在miR-133b mimics转染后的MSCs分泌的外泌体中mi R-133b含量较转染miR-con组显著增加(p<0.001);Western Blot显示外泌体标志蛋白CD9,CD63,CD81在离心后的混悬液中均有表达。实验3:荧光定量PCR显示,ICH+miR-133b组miR-133b表达水平较ICH+miR-con组显著升高(p<0.001)。Westen blot均显示ICH+miR-133b组RhoA表达较ICH+mi R-con组显著升高(p<0.01)。TUNEL染色结果为ICH组较sham组神经元凋亡百分比显著增高。与ICH+mi R-con组相比,ICH+mi R-133b组血肿周围神经元凋亡程度明显改善(P<0.01);FJB染色阳性细胞数在ICH组较sham组明显增多,ICH+miR-133b组FJB阳性细胞数较ICH+mi R-con组较明显下降(P<0.05);ICH+miR-133b组ERK1/2磷酸化,CREB磷酸化水平均较ICH+miR-con组上升(p<0.01;p<0.05)。结论:miR-133b修饰的MSCs可以分泌充足miR-133b的外泌体;外泌体作为载体可将miR-133b传递给脑组织细胞;miR-133b进而通过靶向RhoA发挥对大鼠ICH后脑损伤的神经保护作用,其机制可能是激活ERK1/2-CREB抗凋亡通路。