目的从小鼠成肌细胞和腿肌组织中分别筛选与MEF2C和CFL2互作的蛋白,为深入研究这两种蛋白在肌肉中的作用提供理论依据。方法利用免疫共沉淀的方法提取互作蛋白复合物,对提取的复合物进行SDS-PAGE分离和Western Blotting验证。将SDS-PAGE分离出的差异性条带用胰蛋白酶进行酶切,将酶切后的肽段进行液相色谱分离,最后通过电喷雾质谱技术分析肽段组成并鉴定蛋白质,分别获得与MEF2C和CFL2互作的细胞蛋白谱和组织蛋白谱。利用免疫共沉淀和Western Blotting的方法对筛选出的与MEF2C和CFL2互作的蛋白进行验证。结果1、以小鼠C2C12细胞总蛋白为样本,利用SDS-PAGE成功分离出一条差异性条带,经质谱测序发现含有β-actin、GAPDH、LDHA、MDHM蛋白。通过Western Blotting对质谱筛选出的蛋白进行验证,结果表明在天然状态下MEF2C蛋白与β-actin、GAPDH、LDHA、MDHM蛋白之间存在相互作用。2、用小鼠腿肌组织总蛋白为样本,经免疫共沉淀、质谱测序和Western Blotting验证,结果发现在天然状态下CFL2蛋白与Ndufb7蛋白之间存在相互作用。结论1、本实验利用免疫共沉淀联合质谱的技术首次从小鼠成肌细胞C2C12中成功筛选并鉴定出与MEF2C相互作用的四种蛋白(β-actin、GAPDH、LDHA、MDHM)。2、首次利用免疫共沉淀联合质谱的技术从小鼠腿肌中成功筛选并鉴定出与CFL2相互作用的蛋白Ndufb7。