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本研究的目的是对香菇酯酶、过氧化物酶同工酶进行聚丙烯酰胺凝胶电泳技术指标筛选,并将筛选出的指标应用于香菇品种鉴定和杂交优势预测。同时通过农艺性状对香菇品种进行了鉴定,并将农艺性状鉴定的结果与同工酶鉴定的结果进行了比较。研究结果如下:
一、香菇品种同工酶鉴定技术指标的筛选结果(一)电泳凝胶浓度的筛选结果浓缩胶浓度在3.0%-4.0%之间对酯酶、过氧化物酶的电泳结果无影响,分离胶浓度在6.5%-10%之间时,两种酶的电泳结果有差异。酯酶同工酶最适分离胶浓度7.5%-8.5%,过氧化物酶同工酶的最适分离胶浓度在7.5%-9.0%之间。二者共同适用的分离胶浓度范是7.5%-8.5%。(二)染色方法的比较结果不同染色方法对酯酶、过氧化物酶的染色效果各不相同。酯酶的最佳染色方法是试验处理中的方法三,其底色干扰小,操作简单,弱带也能很好的显现。过氧化物酶的最佳染色方法是NH3CI法,但此方法的缺点是配制成分很复杂,效果仅次于NH3CI法的是醋酸联苯胺法,其最大缺点是底色干扰较大,但简便快捷。若适当缩短染色时间可减少底色干扰,因此基本法仍有很大的应用价值。(三)不同提取方法的比较结果不同的提取液对酯酶和过氧化物酶的电泳结果有影响。试验结果表明,两种酶的最佳提取液是pH8.3的TBE缓冲液。(四)最佳取样方法的比较结果两种同工酶在菌丝各取样时期及子实体的不同取样部位的酶谱变化各有特点。菌丝各取样时期的酯酶同工酶谱带条数相同,只是在酶带颜色上有变化,而过氧化物酶在条带数和酶带颜色上都有变化;子实体不同取样部位的两种同工酶谱带都比菌丝中的少。因此通过本试验可以认为以菌丝作材料较好,且25天的菌丝是最佳选择。因为菌丝中的酯酶和过氧化物酶无论是活性还是酶带数都优于子实体,且人们容易控制菌丝体生长的条件和时间,取材一致性好。
二、香菇品种同工酶鉴定法与农艺性状鉴定法的比较单独用酯酶和过氧化物酶同工酶聚类的结果大体一致,都是将10个香菇菌株分成两大组,其中过氧化物酶的鉴定结果与农艺性状的鉴定结果相吻合。同时用酯酶和过氧化物酶进行聚类时,鉴定结果与单独使用一种酶的聚类结果和农艺性状的聚类结果都有区别。整体来看,过氧化物酶同工酶较适合鉴定香菇。
三、同工酶电泳对香菇杂交优势的预测通过对4个香菇菌株及其10个杂交子进行酯酶同工酶、过氧化物酶同工酶电泳分析,进而揭示几个杂交亲本间的遗传差异和亲缘关系,同时为杂交子代杂种优势强弱的预测提供理论依据。