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目的:评估妊娠期糖尿病(GDM)患者孕期及产后6-8周胰岛β细胞功能和胰岛素抵抗状态,探索GDM患者产后胰岛素抵抗的影响因素。同时应用非标记定量蛋白质组学的方法比较妊娠期糖尿病患者和糖代谢正常孕妇网膜脂肪组织蛋白的表达差异,找寻妊娠期糖尿病胰岛素抵抗的干预靶点。最后,利用3T3-L1脂肪细胞模型在体外模拟GDM孕妇脂肪组织,探索蛋白质组学鉴定到的差异蛋白脂肪细胞膜相关蛋白(APMAP)在胰岛素抵抗中的作用。方法:纳入来我院产检的孕周匹配的GDM孕妇和糖耐量正常(NGT)的孕妇各60例。比较两组一般资料、胰岛β细胞功能和胰岛素抵抗状态;同时纳入产后6-8周来我院随访的有GDM病史的患者223例,行75g口服葡萄糖耐量试验。观察GDM患者产后6-8周的临床转归;比较GDM产后糖代谢正常和糖代谢异常患者、产后糖尿病和糖尿病前期患者的一般资料、胰岛β细胞功能和胰岛素抵抗状态。最后利用多重线性回归分析找寻GDM产后胰岛素抵抗的独立影响因素;蛋白质组学检测样品来源于我院接受剖宫产手术的GDM和NGT孕妇各6例,术中留取腹部网膜脂肪组织。脂肪组织经过裂解、蛋白定量后,利用液相色谱串联质谱分析获取肽段质谱图。运用Maxquant分析软件对结果进行分析,获取蛋白质信息并进行基因注释和功能分类,同时计算表达差异的蛋白。最后挑选表达差异较大的蛋白APMAP利用Western blot和免疫组化进行验证;体外试验,将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞,分化过程第2、4、6、8天检测APMAP的表达量。在APMAP表达稳定后利用si RNA干扰的方法特异性抑制脂肪细胞APMAP的表达并进行验证。利用Western blot的方法检测抑制APMAP表达后对脂肪细胞胰岛素信号转导通路及NFκB炎症通路的影响。结果:孕24-28周时,GDM孕妇与NGT孕妇胰岛素分泌指数(HOMA-β)无明显差异,GDM孕妇胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)明显高于NGT孕妇;48.4%的GDM患者在产后6-8周仍存在不同程度的糖代谢异常;GDM患者产后6-8周糖代谢异常的患者HOMA-β无明显变化,但HOMA-IR较高(P<0.01);多元逐步回归分析结果显示低龄生育,产后高BMI,低密度脂蛋白(LDL-C)、2小时血糖和1小时胰岛素水平升高以及有糖尿病家族史是GDM产后胰岛素抵抗的独立危险因素;蛋白质组学结果共鉴定蛋白3528个,差异表达蛋白66个。其中47个在GDM患者网膜脂肪组织中表达下调,19个表达上调,APMAP是其中下调较明显的蛋白之一;细胞定位结果显示鉴定到的蛋白中68.2%为细胞质蛋白,15%为膜蛋白;免疫组化结果证实APMAP属于膜蛋白,Western blot结果也显示APMAP在GDM孕妇脂肪组织中表达明显下调;体外试验中,APMAP的表达量从脂肪细胞分化的第2天到第6天逐渐增加,至第6-8天趋于稳定;在成熟的3T3-L1脂肪细胞中抑制APMAP的表达,IRS-1和Akt表达无明显变化,但胰岛素刺激后p-IRS-1和p-Akt表达较正常对照组明显减少。同时,抑制APMAP表达后,脂肪细胞p65表达无明显变化,p-p65较对照组明显增多。结论:胰岛素抵抗是GDM孕期及产后糖代谢异常主要病理生理基础。48.4%的GDM患者产后6-8周存在糖代谢异常,加强产后糖筛查有助于2型糖尿病的早期发现和干预。通过生活方式的干预适当降低产后体重、血脂和血糖水平有助于缓解胰岛素抵抗状态。非标记定量蛋白质组学适用于妊娠期糖尿病患者网膜脂肪组织的分析,蛋白检出较多,膜蛋白覆盖率较高,膜蛋白APMAP在GDM患者网膜脂肪组织中表达下调。体外试验证明APMAP的表达量先随着脂肪细胞分化过程的推进而逐渐升高,后趋于稳定。在成熟脂肪细胞中抑制APMAP表达可以导致胰岛素信号通路受损并激活NFκB炎症通路。因此,APMAP在脂肪组织中表达下调会损伤胰岛素信号通路和激活炎症通路导致慢性炎症反应,这可能是GDM患者胰岛素抵抗的发生机制之一。