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目的:通过匀浆大鼠脊髓,利用基于Percoll的密度梯度离心技术,构建一种用时短、分层清晰、稳定、高效制备大鼠脊髓突触体(Synaptosomes,Syn)的方法。方法:用断头法将大鼠快速处死,取出除去马尾部分的脊髓组织,用大量的预冷的蔗糖/EDTA缓冲液(10ml/g)清洗3次以除去血液成分,滤纸吸干。每克脊髓组织加入9ml预冷的蔗糖/EDTA缓冲液,置于15ml的预冷玻璃匀浆器中,轻轻匀浆10次。将匀浆液置于10ml试管中,4℃离心10min,1000g。小心的吸出上清液置于干净的预冷试管中,用BCA法测定上清液蛋白浓度,调节蛋白浓度至4-5mg/ml,即S1部分。将2ml S1部分轻轻的加入至3%Percoll分层之上,19500g,离心10min(调整离心机加速减速500r/min),将10%Percoll、15%Percoll、23%Percoll分层之间的高密区(F3、F4)轻轻的吸取出置于干净的预冷的离心管中,加入大量的PBS缓冲液,离心10min,14000g,弃上清,3次,4℃保存,将沉淀重悬于PBS中备用。将上述制备的沉淀悬浮液,制备标准电镜切片,电镜观察。运用免疫蛋白印记(Westernblot,WB)对突触体标志蛋白Synaptophysin、PSD95表达情况进行分析。结果:Percoll密度梯度液离心后分层明显,电镜下观察脊髓突触体形态结构完整,可见突触体成椭圆形,包膜完整,其内含有大量的突触小泡、单个或多个线粒体,突触前成分、突触间隙、突触后致密区保持完整。通过凝胶成像系统可清楚观察到突触前膜标记蛋白Synaptophysin,突触后致密区(Postsynaptic density,PSD)标记蛋白PSD95,蛋白β-actin灰度。结论:本研究通过利用不连续性Percoll密度梯度离心法制备脊髓突触体是一种省时、便捷、高效的的方法。