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目的：构建猪孕烷X受体(pgPXR)重组质粒,利用脂质体法转染至人肝癌细胞中使之表达,为后续pgPXR天然活性物质的筛选以及在动物生理学和药理学上的研究提供可行细胞模型。方法：从新鲜猪肝中提取RNA,以反转录产物为模板扩增pgPXR基因编码序列。琼脂糖凝胶电泳鉴定成功后,酶切、连接PCR扩增纯化产物与pCI-neo载体,并转化至感受态细胞DH5α,在带有氨苄(Amp)抗性的培养基中培养,从中挑取阳性克隆进行双酶切,酶切正确的菌液送去测序,将测序结果与欲得到的目的序列进行比对,由此判断是否构建成功pCI-pgPXR重组质粒。pCI-pgPXR重组质粒构建成功后,大量扩增并且抽提质粒。设pCI-pgPXR+pGL-3A4-Luc转染组、pCI-neo+pGL-3A4-Luc转染组、pGL-3A4-Luc转染组和空白组四组,利用Lipofectamine TM2000脂质体介导pCI-pgPXR转染进人肝癌细胞HepG2细胞株,5h后作用利福平(Rif),48小时后检测荧光素酶活性,并予实时荧光PCR(qPCR)、蛋白免疫印迹术(Western blotting)二者分别检测pgPXR在HepG2细胞中的mRNA表达水平和蛋白表达水平。结果：(1)PCR扩增pgPXR基因编码序列,琼脂糖凝胶电泳检测获得大小约为1266bp的目的条带,与预期大小相符,表明pgPXR编码序列扩增成功；对连接转化后的重组质粒进行双酶切,琼脂糖凝胶电泳检测获得约1266bp的pgPXR目的基因条带和约5200bp的pCI-neo载体带两条条带。菌液送去测序,其结果与欲得到的目的基因序列进行比对,完全一致,表明成功构建出pCI-pgPXR重组质粒。(2)利用脂质体Lipofectamine TM2000将重组质粒pCI-pgPXR转染入HepG2细胞,5h后作用Rif,48h后检测荧光素酶活性,pCI-pgPXR+pGL-3A4-Luc转染组的荧光素酶活性明显高于pCI-neo+pGL-3 A4-Luc转染组、pGL-3A4-Luc转染组和空白组,实时荧光PCR及Western blotting检测pgPXR mRNA表达水平和pgPXR蛋白表达水平pCI-pgPXR+pGL-3A4-Luc转染组均明显高于pCI-neo+pGL-3 A4-Luc转染组pGL-3A4-Luc转染组和空白组,pCI-neo+pGL-3 A4-Luc转染组、pGL-3A4-Luc转染组和空白组间无明显差异。结论：1.成功构建pCI-pgPXR重组质粒。2. pCI-pgPXR重组质粒转染至人肝癌HepG2细胞能够实现pgPXR的成功表达。