目的探究胆汁淤积性肝硬化患儿肝脏中肝干细胞的动员,建立及评价胆汁淤积性肝硬化小鼠模型,经脾脏体内移植肝干细胞HP14-19,探讨HP14-19在胆汁淤积性肝硬化中的分化。重组腺病毒Ad-CXCR4和Ad-CXCR7诱导肝干细胞,探讨SDF-1/CXCR4和SDF-1/CXCR7对HP14-19增殖、迁移和抗氧化应激损伤的影响。方法1.随机选取我院100例BA患儿为实验组,20例胆总管囊肿患儿为对照组,比较血清AFP水平;选取20例胆道闭锁患儿和20例胆总管囊肿患儿肝脏组织标本行免疫组织化学检测卵圆细胞标志物ov-6,ckit的表达情况。2.84只balb/c小鼠随机分为实验组(56只)和对照组(28只),实验组采用腹中线小切口行胆总管结扎手术,对照组行假手术。术后观察小鼠一般情况及肝脏大体结构;全自动生化分析仪检测实验组与对照组术后1d、3d、5d、7d、14d、21d、28d血清肝脏生化指标(TBIL、DBIL、ALT、AST);H&E染色观察术后相应时间点肝脏组织形态学改变;术后28d小鼠肝脏组织行masson染色和免疫组织化学检测,观察实验组和对照组胶原纤维与a-SMA、CK-19蛋白的表达情况。3.红色荧光蛋白RFP-luc标记HP14-19,经脾脏体内移植至胆汁淤积性肝硬化小鼠模型中,对照组回输PBS,活体成像检测HP14-19在损伤肝脏的定植情况。荧光染料PKH26标记HP14-19,显微镜和检测HP14-19在胆汁淤积性肝硬化中的定植及分化情况。4.重组腺病毒Ad-CXCR4和Ad-CXCR7感染HP14-19细胞,流式细胞术和Western blot检测细胞膜上CXCR4/CXCR7受体的表达;MTT法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞迁移;过氧化氢(H2O2)处理细胞建立氧化应激损伤模型,MTT法检测细胞活力;酶学法检测LDH和SOD活性,评价CXCR4/CXCR7介导SDF-1诱导HP14-19细胞增殖、迁移和抗氧化应激损伤作用。结果1.100例实验组患儿中有92例患儿血清AFP明显上调,而对照组患儿均在正常范围;实验组患儿肝脏组织免疫组织化学染色ov-6、c-kit表达水平明显高于对照组(P<0.01)。2.与对照组相比,实验组小鼠术后一般情况较差,胆囊、胆总管扩张,胆汁淤积;血清肝脏生化指标显著升高(P<0.05),肝脏组织HE染色见肝小叶结构改变,胆管增生;术后28d肝脏组织masson染色可见实验组有胶原纤维形成,免疫组织化学染色a-SMA、CK-19表达明显高于对照组(P<0.05)。3.活体成像技术和显微镜下显示实验组HP14-19经脾脏体内移植后在损伤肝脏中有表达,共聚焦显微镜尚未观察到表达PKH26的HP14-19表达胆管上皮细胞标志物CK-19。4.感染腺病毒Ad-CXCR4/CXCR7后,HP14-19细胞膜CXCR4/CXCR7受体水平显著上调;高表达CXCR7可增强细胞增殖活性,而对CXCR4无显著效果;高表达CXCR4或CXCR7可显著增强SDF-1诱导的HP14-19细胞的迁移和氧化应激状态下的细胞存活率,其中,CXCR7对迁移效应较强;与对照组比较,高表达CXCR4或CXCR7可降低H2O2造成的细胞氧化损伤,LDH活性,增高SOD活性。结论卵圆细胞存在于胆道闭锁患儿肝脏组织中,参与肝脏损害、胆汁淤积性肝硬化等病理过程。小鼠腹中线小切口胆总管结扎手术可成功构建胆汁淤积性肝硬化模型,肝干细胞经脾脏体内移植可成功定植于损伤肝脏,但尚未观察到其分化为胆管上皮细胞。CXCR7参与了SDF-1诱导的HP14-19细胞增殖作用,且CXCR4/CXCR7介导SDF-1诱导HP14-19细胞的迁移和抗氧化应激损伤作用。