拟南芥phi-1基因的克隆与功能研究

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磷酸饥饿处理烟草BY-2培养细胞3 d,能使细胞周期停滞而处于G1期。加入磷酸后能够诱导phi-1的短暂表达而促使细胞从停滞状态重新进入细胞周期,从phi-1的表达模式看,phi-1并不是细胞周期的调控基因,而是能是细胞从停滞状态重新进入细胞周期。目前关于phi-1的表达特性以及功能了解不多。为了研究phi-1的表达特性以及对拟南芥生长发育的影响,我们利用pCAMBIA载体中CaMV35S启动子、GUS基因分别与phi-1编码区序列、phi-1基因的启动子区及上游调控序列构建了phi-1过量表达载体、phi-1::GUS植物转化载体。研究结果表明,过量表达的转基因株系促进了初生根和下胚轴的伸长,但对根毛区的发育和侧根的形成无显著影响。过量表达也促进了拟南芥的发育,表现为早熟。观察不同生长期的阳性转化植株GUS活性的分布情况,并与野生型做对比,发现转基因株系叶原基、分化中的气孔保卫细胞、分化中的叶表皮毛、根的成熟区、幼嫩器官中的维管束等部分有GUS表达;而且还发现在同一器官中,不同组织细胞中phi-1::GUS的表达并不同步,明显显示出与细胞的分化紧密相关。这一结果表明phi-1基因可能参与组织细胞的分化。
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