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目的:MYB 结合蛋白 1A(MYB bindingprotein 1A,MYBBP1A)是重要的核仁转录调控因子。研究发现MYBBP1A基因影响胚胎早期发育。前期通过对孤独症家系的全外显子测序及关联分析发现患儿携带MYBBP1A基因的2个错义突变。本研究的目的是探讨MYBBP1A基因对神经发育的作用以及突变对神经发育的影响。方法:1.通过Sanger测序验证前期全外显子测序中发现的孤独症患儿携带的MYBBP1A基因突变,并检测生物学父母的DNA样本确定突变的来源。2.构建人源野生型和突变型MYBBP1A质粒,通过电穿孔法转染小鼠皮层神经元,通过Western blotting检测野生型和突变型MYBBP1A蛋白的表达情况。3.构建小鼠Mybbp1A的敲减shRNA,通过电穿孔法转染小鼠皮层神经元,用流式细胞仪筛选出GFP阳性神经元,提取RNA,经逆转录和qPCR法验证shRNA敲减效率。4.采用磷酸钙转染法将野生型和突变型MYBBP1A质粒以及敲减shRNA转染到体外培养的小鼠皮层神经元内,进行免疫组织化学染色后,通过共聚焦显微镜观察神经元发育情况。5.通过子宫内电转法,将野生型和突变型MYBBP1A质粒转染到胎鼠侧脑室的神经前体细胞中,通过荧光显微镜观察神经元迁移情况。结果:1.孤独症患儿携带两个MYBBP1A错义突变,T875M和T1227K。其中T875M来源于母亲,T1227K来源于父亲。2.在转染的皮层神经元中,所有突变均有表达,且表达量与野生型相比无统计学意义。3.在体外皮层神经元中,敲减小鼠Mybbp1A基因的shRNA中shRNA-3敲减效率最高。4.在体外培养的小鼠皮层神经元中,突变型MYBBP1A对神经发育有影响。敲减Mybbp1A后神经元树突总长度和树突总分支数都减少,而转染人源野生型MYBBP1A后树突总长度变长。5.敲减Mybbp1A后小鼠皮层神经元树突棘密度增加,而将人源野生型和突变型MYBBP1A转染到敲减了小鼠Mybbp1A的皮层神经元中,则树突棘密度下降。6.在体内将野生型MYBBP1A及突变质粒转染到胎鼠神经前体细胞中,野生型表达的神经元迁移快于突变组。结论:1.敲减Mybbp1A影响树突发育,但可通过转染人源MYBBP1A野生型挽救。而MYBBP1A突变型影响蛋白质的功能。2.与突变组及pCAG相比,过表达野生型MYBBP1A促进神经元迁移。并且MYBBP1A突变型影响蛋白质的功能。