本文对猪Tiki基因的表达进行了初步的研究,并成功构建了猪Tiki1基因置换型打靶载体。Tiki基因为哈佛大学儿童医学院贺熹教授的实验室最新发现的基因,在Wnt信号通路中作为抑制因子而发挥作用。Tiki基因包括Tiki1和Tiki2两种,其中Tiki1基因在啮齿类动物(如小鼠和大鼠)的体内缺失。在蛙胚胎早期发育的过程中,Tiki1的原位杂交表明其分布在胚胎体轴的前端,暗示对于体轴前端结构的发育起作用,而在蛙上进行的功能研究实验证实了Tiki1确实在头部诱导的过程中起着决定性的作用,类似于Wnt信号通路中的另一抑制因子DKK-1。但由于小鼠体内缺乏Tiki1基因的表达,使用小鼠作为研究人类Tiki1基因缺失疾病模型的传统途径被阻断,与人类在生理学、病理学上都极为相近的猪成为研究Tiki1功能的理想哺乳动物模型。本实验用PCR的方法在成体猪的肝脏、肺、乳腺和卵巢四种器官中检测到Tiki1基因的表达,在心脏中检测到了Tiki2基因的表达。从上述器官中获取的Tiki1和Tiki2部分cDNA片段测序结果与不同物种的比对显示,我们获取Tiki基因部分片段在不同物种中具有高度同源性(80%以上),说明此基因高度保守,可能具有重要的功能。为了和Tiki基因在蛙和鼠上的表达模式做对比,对12-15天,即原条期到神经沟阶段的猪胚胎进行了全胚胎原位杂交,实验结果显示Tiki1基因在胚胎前端边缘处表达,说明在猪的胚胎发育过程中Tiki1极有可能像在蛙上一样,对头部的诱导起着关键性的作用。在猪胚胎上进行的Tiki2基因的原位杂交结果和Tiki2在鼠胚胎上的原位杂交结果是一致的,均为沿着胚胎的中轴线纵向分布,且信号不强,貌似在胚胎中的表达丰度也不及Tiki1基因。为了进一步地证实猪Tiki1是否具有头部诱导的功能,本实验成功构建了猪Tiki1基因置换型打靶载体并进行了初步的细胞筛选,以期在后续的研究中对Tiki基因在猪胚胎早期发育的过程中的作用做进一步的探索。总之,本文对猪Tiki基因的表达进行了初步的研究,并成功地构建了猪Tiki1基因置换型打靶载体。本实验获得的成果为深入研究Tiki基因在猪胚胎早期发育的过程中的作用奠定了基础。