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鹅细小病毒病(goose parvovirusis, GP)是由鹅细小病毒(goose parvovirus, GPV)感染而引起雏鹅或雏番鸭的一种高接触性急性传染病。GPV基因组编码的结构蛋白主要有VP1、VP2和VP3, VP3作为主要的结构蛋白,约占总蛋白的80%,为病毒衣壳的主要成分,可以刺激机体产生中和抗体,使其成为研制基因工程疫苗的首选基因。改造的禽痘病毒在基因表达、活载体疫苗开发和治疗疾病方面发挥着重要作用,它缺失了禽痘病毒的致病基因,但仍然具有复制活性,使其安全性高,而使其成为应用最广泛的活载体疫苗研制的表达载体。目前,国内外对GP防制一般多采取传统疫苗免疫成年母鹅的方式,使雏鹅从母源抗体中获得免疫保护,也有直接免疫雏鹅使其获得免疫保护。但是,弱毒疫苗和灭活疫苗等传统疫苗存在着毒力返强、灭活不彻底、散毒、不能区分免疫与自然感染等缺陷和不足,急需研制一种安全、有效的新型疫苗。截止目前,国内外对GPV保护性抗原基因的禽痘病毒活载体疫苗研究仍处于起步阶段,在GPV重组禽痘病毒载体疫苗方面存在较大的研究空间。本研究以前期构建的含YBLJ株GPV-VP3基因的pMD18T-GPV-VP3质粒为模版,经带Bam H I酶切位点的引物进行PCR,扩增到GPV-VP3基因并进行TA克隆,通过Bam H I酶切位点将GPV-VP3基因连入pSY538载体启动子下游,构建pSY538-VP3质粒；经ClonExpress II One Step Cloning Kit将报告基因Lac Z克隆到pSY538-VP3质粒的Sma I酶切位点,构建pSY538-VP3-LacZ质粒；用NotI将其单酶切,将VP3表达盒和Lac Z表达盒定向插入到转移载体pSY681,构建表达GPV-VP3基因的重组禽痘病毒转移载体pSY681-GPV-VP3。经酶切与测序鉴定,将基因序列和连接方向正确的质粒pSY681-GPV-VP3转染事先感染S-FPV-017株亲本FPV的鸡胚成纤维细胞(CEF),通过同源臂交换,用蚀斑法筛选并纯化,经10轮筛选得到纯化的能表达GPV-VP3基因的重组禽痘病毒rFPV-GPV-VP3,经PCR方法检测重组禽痘病毒rFPV-GPV-VP3中VP3基因的存在情况,通过间接免疫荧光和Western-blot检测表达产物的反应原性。本研究为进一步开展GPV-VP3基因重组禽痘病毒载体疫苗的体内免疫试验研究,以及探讨GPV-VP3基因重组禽痘病毒载体疫苗的免疫保护力和免疫保护机制奠定基础。