本研究首先利用原核系统表达SARS-CoV S1蛋白和霍乱毒素B亚单位CTB蛋白制备了相应的多克隆抗体。然后,成功构建了真核表达质粒pVAX-S1、pVAX-CTB;并利用SOE-PCR技术将S1基因和CTB基因进行连接,得到融合基因真核表达质粒pVAX-S1-CTB。利用脂质体2000将各种真核表达质粒转染BHK-21细胞。间接免疫荧光的结果表明,各种真核表达质粒均能在哺乳动物细胞中表达,为后续动物免疫实验提供了理论基础。利用6周龄昆明鼠进行DNA疫苗免疫效果研究。在动物免疫实验中设计6个处理组,即PBS组(免疫灭菌PBS)、pVAX载体对照组(免疫真核载体pVAX1)、病毒对照S1组(免疫真核表达质粒pVAX-S1)、佐剂对照CTB组(免疫真核表达质粒pVAX-CTB)、联合免疫S1~+CTB组(联合免疫pVAX-S1和pVAX-CTB)和融合免疫S1-CTB组(免疫融合基因真核表达质粒pVAX-S1-CTB)。检测小鼠脾脏和外周血特异性T淋巴细胞增值效果、CD4~+和CD8~+T淋巴细胞数量变化、特异性CTL活性、IL-4和IFN-γ产量以及血清中特异性IgG抗体效价。瞬时转染实验结果表明,重组真核表达质粒pVAX-S1、pVAX-CTB和pVAX-S1-CTB均可在哺乳动物细胞中表达。免疫后42d,两疫苗组T淋巴细胞增殖效果明显高于各对照组,差异极显著(P<0.01)。联合组脾脏和外周血CD4~+T细胞均在免疫后42d达到最大值;联合组脾脏和外周血CD8~+T细胞均在免疫后42d达到最大值。特异性细胞毒性作用结果表明,免疫后42d联合组及融合组细胞毒性效果明显,融合组效果尤佳。小鼠血清抗S1蛋白IgG含量检测结果表明,两疫苗组IgG含量均呈一定的增长趋势;免疫后42d,融合组IgG含量明显高于其他各组,差异极显著(p<0.01)。外周血IFN-γ和IL-4含量检测结果表明,免疫后42d联合组及融合组以上两种细胞因子含量明显高于其他各对照组,且融合组刺激产生更多的细胞因子,二者差异显著(p<0.05)。综上所述,通过本试验研究表明,CTB基因在配合SARS-CoV S1抗原基因免疫过程中,不但能够促进机体的细胞免疫应答能力,而且能够提高机体体液免疫应答的能力。本实验结果为进一步研究CTB的生物活性提供了实验依据,同时为探讨开发研制新型免疫增强型抗SARS病毒核酸疫苗提供了理论基础。