奥曲肽对人肝星状细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

来源 :泸州医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wearetian
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目的:研究奥曲肽对活化人肝星状细胞凋亡的影响和凋亡相关蛋白Bd-2、Bax表达的影响,探讨奥曲肽抗肝纤维化可能的作用机制。方法:将人肝星状细胞株HSC-LX2培养于含10%胎牛血清的DMEM培养液,置于37℃、5%CO2孵箱内培养,不同浓度的奥曲肽分别作用于传代的人肝星状细胞24h、48h后,应用免疫细胞化学法检测传代培养HSC-LX2中α-SMA、Desmin蛋白的表达,应用FITC-TUNEL检测各组细胞凋亡,应用免疫细胞化学法检测HSC-LX2中Bcl-2、Bax蛋白表达的情况,应用Western-blot法检测HSC-LX2中Bcl-2蛋白表达的情况。结果:(1)活化HSC-LX2胞浆中α-SMA、Desmin的表达均阳性;(2)FITC-TUNEL法检测细胞凋亡率结果示:奥曲肽作用于HSC-LX2 24h后,HSC凋亡率出现明显增加,10-5mmol/L组、10-2mmol/L组细胞调亡率分别为11.99%±1.89%、20.12%±2.5%,均显著高于正常对照组(4.92%±0.74%),差异有统计学意义(P<0.05),10-2mmol/L组细胞调亡率高于1 0-5mmol/L组,差异有统计学意义(P<0.05);奥曲肽作用于HSC-LX2 48h后,HSC凋亡率也明显增加,1 0-5mmol/L组、10-2mmol/L组细胞调亡率分别为 14.62%±1.93%、23.71%±2.85%,均显著高于正常对照组(6.23%±0.97%),且差异有统计学意义(P<0.05),1 0-2mmol/L组细胞调亡率高于1 0-5mmol/L组,差异有统计学意义(P<0.05)。10-5mmol/LOCT 作用于 HSC-LX2 24h、48h 后,48h组与24h组相比细胞凋亡率有明显升高,有统计学差异(P<0.05);10-2 mmol/L OCT作用于HSC-LX2 24h、48h后,48h组与24h组相比细胞凋亡率也有明显升高,也具统计学差异(P<0.05)。说明奥曲肽对HSC-LX2有一定促凋亡的作用;(3)免疫细胞化学法检测Bd-2、Bax蛋白表达的情况,结果显示,奥曲肽干预HSC-LX2 24h后,10-5mmol/L组、10-2mmol/L组肝星状细胞Bax蛋白的表达(0.19±0.04,0.26±0.06)逐渐升高,与对照组(0.13±0.04)相比均升高,差异均有统计学意义(P<0.05),I 0-5mmol/L OCT组与10-2mmol/LOCT组比较差异有统计学意义(P<0.05);10-5mmol/L组、10-2mmol/L组肝星状细胞Bcl-2的表达(0.25±0.04,0.15±0.09)逐渐减低,与对照组(0.33±0.06)相比均降低,差异均具有统计学意义(P<0.05),10-5mmol/L OCT组与10-2 mmol/LOCT组比较差异有统计学意义(P<0.05)。奥曲肽干预HSC-LX2 48h后,10-5mmol/L组、10-2mmol/L组Bax蛋白的表达(0.25±0.06,0.49±0.08)逐渐升高,与对照组(0.14±0.03)相比均升高,差异均有统计学意义(P<0.05),1 0-5mmol/LOCT组与10-2mmol/LOCT组比较差异有统计学意义(P<0.05);10-5mmol/L组、10-2mmol/L组Bcl-2的表达(0.21±0.07,0.11±0.04)逐渐减少,与对照组(0.34±0.09)相比降低,差异均具统计学意义(P均<0.05),10-5mmol/LOCT组与10-2mmol/L OCT组之间相比差异有统计学意义(P<0.05)。10-5mmol/L OCT作用于HSC-LX2 24h、48h后,48h组与24h组相比细胞Bax蛋白的表达有明显升高(P<0.05),48h组与24h组相比细胞Bcl-2蛋白的表达有降低,但无统计学差异(P>0.05),10-2mmol/L OCT 作用于 HSC-LX2 24h、48h 后,48h组与24h组相比细胞Bax蛋白的表达有明显升高(P<0.05),48h组与24h组相比细胞Bcl-2蛋白的表达有降低,但无统计学差异(P>0.05)。以上说明奥曲肽能上调Bax的表达,下调Bcl-2的表达;(4)Westem-blot法结果显示,不同浓度奥曲肽干预细胞24h后,与对照组(0.50±0.06)相比,10-5mmol/L组、10-2mmol/L 组 Bcl-2 蛋白的表达(0.41±0.08,0.25±0.07)均明显减弱,差别有统计学意义(P<0.05),10-5mmol/L OCT组和10-2mmol/L OCT组之间比较差别也具统计学意义(P<0.05)。不同浓度奥曲肽干预细胞 48h 后,与对照组(0.50±0.06)相比,10-5mmol/L组、10-2 mmol/L组Bcl-2蛋白的表达(0.34±0.05,0.20±0.07)均明显减弱,差别有统计学意义(P均<0.05),10-5mmol/L OCT组和10-2mmol/L OCT组之间比较差别也具统计学意义(P<0.05)。说明奥曲肽能明显抑制人肝星状细胞Bcl-2蛋白的表达。结论:(1)奥曲肽可以促进人肝星状细胞凋亡,并具有剂量和时间依赖性;(2)奥曲肽可能通过使人肝星状细胞Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,而诱导其凋亡。
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