论文部分内容阅读
目的：本研究通过检测NK细胞主要活化型受体NKG2D的活化型配体MICA在人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞SKOV3和其顺铂耐药细胞SKOV3/CDDP的表达水平及其对NK细胞杀伤活性的影响，探讨卵巢癌耐药与NK细胞免疫的相关性，为卵巢癌的免疫治疗提供理论依据。 方法： 1体外复苏人卵巢浆液性乳头状腺癌亲本细胞SKOV3及其顺铂耐药细胞SKOV3/CDDP，37℃，5％CO2饱和温度下的恒温培养箱中培养，连续传代并冻存细胞。 2 MTT法检测不同浓度的顺铂对人卵巢癌亲本细胞SKOV3及其顺铂耐药细胞SKOV3/CDDP的抑制率，计算半数抑制浓度(IC50)及耐药细胞SKOV3/CDDP的耐药指数。 3应用流式细胞术(FCM)检测NKG2D的主要活化性配体MICA在人卵巢癌亲本细胞SKOV3及其顺铂耐药细胞SKOV3/CDDP表面的表达水平。以荧光指数(FI)表示MICA蛋白表达的相对含量。FI=试验样品均道值/对照样品均道值，均道值=1g(X-mode值)×340。 4采用Ficoll密度梯度离心法分离健康人外周血单个核细胞(PBMC)。 5以健康人外周血单个核细胞(PBMC)作为效应细胞，以人卵巢癌亲本细胞SKOV3及其顺铂耐药细胞SKOV3/CDDP作为靶细胞，应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测在不同效靶比(5:1，10:1，20:1，40:1)时，NK细胞对SKOV3及SKOV3/CDDP的杀伤作用。 结果： 1顺铂对人卵巢浆液性乳头状腺癌耐药细胞SKOV3/CDDP的IC50为35.77mg/L，人卵巢浆液性乳头状腺癌亲本细胞SKOV3的IC50为7.07mg/L；耐药细胞SKOV3/CDDP的耐药指数=35.77/7.07=5.06，可进行耐药试验。 2流式细胞术检测结果：流式细胞仪检测NKG2D的主要活化性配体MICA在人卵巢浆液性乳头状腺癌亲本细胞SKOV3及其耐药细胞SKOV3/CDDP表面均有表达，以亲本细胞SKOV3为对照，按公式计算耐药细胞SKOV3/CDDP中MICA蛋白的相对表达量FI值为0.752，即耐药细胞SKOV3/CDDP表面MICA蛋白的表达量约为亲本细胞SKOV3的0.752倍(P<0.05)(Fig.2、Table2)。 3 NK细胞杀伤活性结果：NK细胞对人卵巢浆液性乳头状腺癌亲本细胞SKOV3及其耐药细胞SKOV3/CDDP的杀伤活性随效靶比的升高而增强，在效靶比5:1时杀伤率分别为(15.50±2.07)％、(10.48±0.95)％；效靶比10:1时杀伤率分别为(32.68±1.42)％、(21.46±1.57)％；效靶比20:1时杀伤率分别为(46.99±3.13)％、(34.21±4.40)％；效靶比40:1时杀伤率分别为(64.00±2.19)％、(55.95±3.47)％，在各效靶比时NK细胞对人卵巢癌亲本细胞SKOV3的杀伤活性均高于对耐药细胞SKOV3/CDDP的杀伤活性，两者相比差异有统计学意义(P<0.05)(Table3)。 结论：NKG2D的主要活化性配体MICA在人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞SKOV3和耐药细胞SKOV3/CDDP的表达差异影响NK细胞的杀伤活性，耐药细胞SKOV3/CDDP在耐药的同时发生MICA表达下调，提示肿瘤细胞在发生耐药的同时获得了免疫逃避能力。