玫瑰挥发油对嗅球毁损大鼠梨形皮质神经元形态影响的研究

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研究背景及目的嗅觉感知起源于嗅上皮中大量受体对气味物质的识别。气味物质进入嗅球后,嗅球将嗅觉信息传递到嗅前核、嗅结节、扣带回、内嗅皮质和梨形皮质。而梨形皮质是哺乳动物嗅觉信息处理所到达的第一层皮质目的地,也是感知气味至关重要的旧皮质。梨形皮质是接收从嗅小球直接突触输入的最大的皮质区域,反过来也可直接接收嗅上皮的输入。尽管表面上很简单,但梨形皮质是极其精细和错综复杂的神经回路。梨形皮质对气味的处理过程中涉及到大量的神经元和回路。嗅球毁损后梨形皮质的神经离断导致一系列第二层中间神经元重要的细胞变化,通过嗅球毁损,切断嗅球和神经元的联系,对梨形皮质第二层锥体细胞神经元有着明显的影响,梨形皮质接收来自嗅球的输入但不投射到嗅球。因此嗅球毁损后嗅觉信息是如何传递的呢?通过嗅球毁损神经离断是否能激发梨形皮质神经再生的潜能呢?本研究以嗅球毁损的大鼠为研究对象,探讨玫瑰挥发油对大鼠梨形皮质神经元再生的影响,及Glu、GABA神经递质的变化,以期为玫瑰挥发油吸嗅对梨形皮质再生及嗅觉损伤与神经系统障碍间的关系提供新的科学依据与启示。第一部分梨形皮质的细胞构筑方法将正常大鼠取脑,固定,脱水,包埋,切片,进行HE染色,观察梨形皮质的形态。结果HE染色显示PC区域神经元细胞完整,呈现三层分布,第二层神经元细胞数量较多;PC区域神经元细胞呈圆形或椭圆形,结构清晰。第二部分嗅球毁损制备梨形皮质神经元溃变模型方法根据大鼠大脑图谱,利用脑立体定位仪找到嗅球位置,钻孔后进行嗅球毁损。同时将造模成功的大鼠随机分为5组:嗅球毁损后24h组、嗅球毁损后72h组、嗅球毁损后7d组、嗅球毁损后14d组、嗅球毁损后玫瑰挥发油吸嗅组。结果嗅球毁损后大鼠较空白对照组食欲下降,活动减少,取脑后观察发现大鼠嗅球部分缺失或损伤。并对玫瑰挥发油组大鼠进行吸嗅。嗅球毁损后1天,吸嗅组大鼠进行玫瑰挥发油吸嗅,每次持续吸嗅1h,2次/d,连续14 d。第三部分嗅球毁损前后大鼠梨形皮质神经元的变化方法将各组大鼠取脑,固定,脱水,包埋,切片,进行尼式染色,免疫组织化学,观察大鼠梨形皮质神经元的变化,并统计各组SD大鼠Glu,GABA灰度值。结果1.对照组梨形皮质神经元形态正常,胞核膜核仁清晰;嗅球毁损后24h,72h梨形皮质发生溃变,尼氏体染色逐渐减弱;嗅球毁损7d后梨形皮质神经元开始重建,尼氏体染色逐渐恢复正常,在第14d梨形皮质神经元尼氏体恢复接近对照组水平;玫瑰挥发油吸嗅组在第14d梨形皮质神经元尼氏体数量高于不吸嗅组。2.Glu免疫反应阳性细胞在梨形皮质中广泛分布,阳性细胞胞体成圆形、椭圆形,呈棕色颗粒状。嗅球毁损后24h,72h后PC神经元阳性细胞数增加,细胞着色加强;嗅球毁损后7d,14d梨形皮质神经元阳性细胞数稍有减少,玫瑰挥发油吸嗅组和对照组相比无明显差别。3.嗅球毁损后梨形皮质中GABA阳性反应神经元细胞和对照组相比减少。玫瑰挥发油吸嗅组大鼠梨形皮质中GABA阳性反应神经元细胞数减少不明显。4.与14d组和72h组比较,玫瑰挥发油吸嗅组Glu灰度值增加,差异有统计学意义(p<0.05)。与14d组和72h组比较,玫瑰挥发油吸嗅组GABA灰度值减少,差异有统计学意义(p<0.05)。结论1、嗅球毁损可造成PC溃变。2、PC神经元溃变后可再生。3、玫瑰挥发油吸嗅对PC神经元溃变后再生具有改善作用。
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