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目的: 1.探讨环丙沙星与黄连素单用或联用时对多药耐药肺炎克雷伯菌的抑菌效果; 2.黄连素是否与环丙沙星起协同抑菌作用; 3.检测单药使用或两药联用时对肺炎克雷伯菌多药耐药外排泵系统AcrAB-TolC转录表达量的变化。 方法: 1.环丙沙星与黄连素单用及联用时对20个肺炎克雷伯菌临床株耐药菌株(MDR1-MDR20)、质控菌株 ATCC和诱导耐药株(RATCC)进行药敏分析。 2.比较两药单用及联用时最低抑菌浓度(MIC)并通过微量棋盘稀释法,计算总合部分抑菌浓度(ΣFIC),分析两种抗菌药物的体外相互作用。 3.对其中5株(MDR5、MDR12、MDR15、ATCC和RATCC)通过杀菌曲线及荧光定量 PCR(RT-PCR)方法测定与环丙沙星与黄连素单用或联用,在曲线和AcrAB-TolC基因转录表达水平的差异。 结果: 1、两药联用与单用环丙沙星或黄连素相比,MIC下降超过1/2 MIC,两药联用起相加作用有77.27%(17/22),起协同作用有18.18%(4/22),只有1株显示无关作用。 2、两药联用组对MDR5、MDR12、MDR15和ATCC菌株与单用黄连1024μg/ml组相比,细菌量下降1.51-4.17 log10CFU/ml,与单用环丙沙星相比,细菌量下降2.41-5.7log10 CFU/ml,单用黄连素1024μg/ml与单用环丙沙星相比,细菌量下降0.9-1.79 log10CFU/ml,但RATCC菌株差异不大。 3、对MDR5、MDR12、MDR15和ATCC菌株,两药联用组与空白对照组相比,acrA、acrB和tolC基因表达明显上升,大于14倍(P<0.05),单用黄连素组与空白对照组相比,acrA、acrB和tolC基因表达也上调4倍(P<0.05)。单用环丙沙星组与空白对照组相比,acrA、acrB和tolC基因表达无明显差异(P>0.05)。但RATCC菌株acrA、acrB和tolC基因转录表达均无明显差异(P>0.05)。 结论: 两药联用在一定程度上能有效抑制多药耐药肺炎克雷伯菌的生长,使耐药外排泵系统AcrAB-TolC转录表达升高。