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目的: 建立压电石英晶体振荡频率检测平台,优化影响液相中抗原抗体反应效率的各项指标,探讨并建立压电石英晶体蛋白传感器反应终点判断方法,以此构建压电石英晶体尿蛋白免疫传感器阵列,进行临床标本的检测并与传统免疫比浊方法进行方法学比较,探索临床应用的可行性。 方法: 1.利用精细微加工法制作石英晶体,在其表面光刻金膜电极,比较不同电极厚度及直径对检测的影响,在此基础上制备2×5型拔插式传感器阵列。更换频率计数卡,将检测系统升级到支持windows NT系列,增加温控系统的功能,进行双电源互补供电、优化PESA V2.0A版频率记录分析软件,并以此构建新型压电石英晶体免疫传感器阵列检测平台。 2.采用SPA法将抗人免疫球蛋白抗体固定于石英晶体表面。探索SPA法固定抗体的一致性和最佳抗体包被浓度,探讨传感器体系稳定的最佳温度—时间条件,PBS缓冲液pH值和离子强度对抗原抗体结合能力的影响。上述条件确定后,利用曲线拟合方法对传感器反应终点进行判断。并拟定判定标准。 3.构建人尿微量蛋白(α-1-微球蛋白、β-2-微球蛋白、微量白蛋白、IgG)免疫传感器阵列检测系统:观察传感器检测的精密度与准确度、线性范围、非特异性反应。绘制各项指标的标准曲线、进行临床标本的检测并与传统免疫分析方法对比,探讨检测临床标本的可行性。 结果: 1.AT切型、基频10MHz、金膜电极直径4.0mm、厚度100nm～150nm范围的石英晶体液相起振能力强、频率稳定、灵敏度高、质量负载好,适合免疫反应的检测。 2.优化后的免疫传感器阵列在单个传感器及阵列、温控系统、PESA V2.0A频率记录分析软件、电源系统等方面达到实验要求。 3.拔插式传感器可有效解决传感器在液相中频率稳定的难题,气相频率可达±1Hz、液相频率可达+2Hz。