自驱动双面短纤维检测循环肿瘤细胞的研究

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癌症是世界上最具破坏性的疾病之一,每年造成数百万人死亡。癌症的可怕之处是癌细胞的转移,可导致高达90%的癌症相关死亡。转移是肿瘤细胞从原发肿瘤部位通过血流逸出、并停留在第二部位形成转移性肿瘤集落,这种在外周血中循环并引发癌症转移、具有干细胞特性的癌细胞称为循环肿瘤细胞。癌症的潜伏期通常长达10年以上,通过定期筛查、早诊断、早干预等措施,可避免癌症发展至中晚期才接受救治的痛苦。因此,外周血中循环肿瘤细胞的检测在肿瘤早筛、临床治疗效果和预后评估过程中都具有极其重要的临床意义。本文通过“肩并肩”静电纺丝技术制备了一侧是聚(苯乙烯-马来酸酐)共聚物、另一侧是聚(苯乙烯-马来酸酐)-己二胺共聚物的双面纤维,再通过冰冻切片技术制备了不同长径比的双面短纤维。为了增加荧光探针和目标物的相互作用,通过酰胺反应将带有氨基修饰的TLS11a适配体修饰到纤维的一侧,通过聚醚酰亚胺和戊二醛将过氧化氢酶固定到纤维另一侧,获得酶和适配体修饰的双面短纤维,并研究了酶的固定和双面短纤维的运动,得知固定化酶具有在较宽范围内均具有较高的活性;过氧化氢酶催化H2O2反应生成氧气推动纤维运动,长度为10μm的双面短纤维均方位移(MSD)最大,荧光响应效果最好。通过将胸腺嘧啶接枝到四苯基乙烯,得到了TPE-T荧光衍生物,将鸟嘌呤接枝到异硫氰酸荧光素上,得到荧光素衍生物FITC-G。通过氢键作用的碱基配对,验证了TPE-T、FITC-G与适配体的聚集诱导发光、聚集诱导淬灭效应。将HepG2细胞作为模型细胞探究双面短纤维对循环肿瘤细胞检测,带有荧光衍生物修饰过的双面短纤维在遇到目标细胞后,特异性适配体和HepG2细胞相互作用,将通过氢键接枝到适配体上的TPE-T、FITC-G置换下来,荧光衍生物由聚集状态变为分散状态,荧光信号改变以此构建了对HepG2细胞特异性响应的自驱动微马达。系统研究了不同长径比、适配体接枝量、过氧化氢浓度对检测效果的影响。检测效果表明在3.5%H2O2浓度下自驱动双面短纤维在1分钟内的检测极限为25 cell/ml,检测范围为102-106 cell/ml。
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