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目的观察缺氧诱导因子- 1α( hypoxia-inducible factor-1, HIF-1α)的活性与靶基因表达的变化,探讨其对体外培养的心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia- reoxygenation,H/R)损伤的影响。方法取(1～3d)SD乳鼠心脏并分离培养成心肌细胞;观察心肌细胞生长情况,分别以台盼蓝染色、免疫细胞化学染色检测心肌细胞活力及鉴定其纯度。于培养的第3天将心肌细胞随机分为3组(每组重复6次) ,包括:①正常对照组,②缺氧/复氧(H/R )组,③甲基乙二酰基甘氨酸(DMOG + H/ R)组;建立缺氧/复氧损伤模型,以脯氨酸羟化酶的抑制剂—甲基乙二酰基甘氨酸(DMOG)进行干预。观察各组心肌细胞的搏动频率;应用酶免疫法检测各组心肌细胞培养上清中的肌钙蛋白I(cTnI)含量;采用RT-PCR法检测各组HIF-1α及下游因子血红素氧合酶-1(HO-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、葡萄糖转运蛋白1( GLUT-1)mRNA水平;采用间接酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组心肌细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule, ICAM -1)的表达;进行脯氨酸羟化酶(P4HA2)小干扰RNA(siRNA)载体的构建。结果分离1只乳鼠所获得的心肌细胞产量约为140万个,且心肌细胞活力为90%以上,纯度达95%。培养4～6h的乳鼠心肌细胞开始贴壁生长,12～24h明显增殖,3～4d后细胞融合成片;心肌细胞由圆形变为梭形、星形、多角形,并出现自发性节律性搏动。与正常对照组相比,H/R组、DMOG+ H/R组心肌细胞的搏动频率均明显减少(P﹤0.01);而DMOG+ H/R组心肌细胞的搏动频率又较H/R组明显升高(P﹤0.01)。与正常对照组相比,H/R组、DMOG+ H/R组的cTnI含量和ICAM-1表达水平明显增高(P﹤0.01),且HIF-1α、HO-1、VEGF、GLUT-1 mRNA水平亦明显增高(P﹤0.01、P﹤0.05)。与H/R组相比,DMOG+ H/R组心肌细胞HIF-1α、HO-1、VEGF、GLUT1mRNA水平明显增高,而cTnI含量和ICAM-1表达水平则明显降低(P﹤0.05)。完成P4HA2siRNA慢病毒载体构建。结论DMOG干预体外培养的心肌细胞可以使HIF-1在mRNA水平稳定表达;HIF-1的稳定表达可以促进下游靶基因HO-1、VEGF、GLUT1mRNA的表达;与H/R组相比,DMOG干预组心肌细胞的搏动频率明显升高且心肌细胞cTnI含量和ICAM-1含量有所降低,说明HIF-1对心肌细胞缺氧/复氧损伤具有保护作用,其具体机制有待进一步研究。P4HA2siRNA慢病毒载体构建已经完成,对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用有待于进一步探讨。