论文部分内容阅读
至目前为止,MircroRNA-647在胃癌中的作用尚不完全清楚。本次研究发现在胃癌组织中,miR-647的表达受到抑制,而且这一现象与胃癌转移具有相关性。另外,经体外细胞实验发现miR-647能够抑制胃癌的侵袭及转移能力;miR-647能够直接结合SRFmRNA 3’端的非编码区,而且SRF能够结合位于MYH9启动子上CarG box;CCG-1423是RhoA/SRF介导基因转录通路的抑制剂,能够抑制MYH9的表达,在SRF表达下调的细胞中尤为显著。在裸鼠原位成瘤模型中,过表达miR-647能够抑制MGC 80-3细胞转移能力。同时,对109例人体胃癌组织标本验证发现,miR-647与总体生存率呈正相关,与SRF表达水平呈负相关:SRF与MYH9表达呈正相关,二者高表达提示患者预后差。本研究证明miR-647能够通过SRF/MYH9信号通路抑制胃癌侵袭与转移。本课题由三个部分组成,具体内容如下:第一章:胃癌组织MicroR-647表达下调并抑制胃癌细胞转移目的:验证胃癌组织MicroR-647表达与临床病理参数相关性;初步证实MicroR-647表达对胃癌细胞侵袭、转移的影响。方法:qPCR、慢病毒转染MicroR-647过表达、瞬时转染MicroR-647过表达和敲低、Transwell小室和划痕细胞学实验。结果:胃癌组织MicroR-647表达显著下调;MicroR-647表达与TNM分期、T分期和N分期呈负相关;胃癌细胞MicroR-647表达抑制胃癌细胞侵袭与转移。第二章:胃癌MicroR-647调控SRF/MYH9表达抑制胃癌细胞转移目的:探索MicroR-647抑制胃癌细胞转移分子机制。方法:细胞转染、WB、qPCR、IHC、原位杂交ISH、CoIP、ChIP、截短质粒构建与荧光素酶报告基因检测等实验。结果:Rho通路相关的miR-647抑制胃癌细胞SRF与MYH9表达;MiR-647靶向抑制SRF表达,进而间接抑制MYH9 mRNA减弱胃癌细胞转移及侵袭能力;MiR-647与SRF和MYH9表达水平呈负相关,并与胃癌患者不良预后相关;CCG-1423有效抑制胃癌细胞转移,Rho/SRF/MYH9信号通路轴的激活促进胃癌转移并提示胃癌患者不良预后。第三章:MicroR-647与胃癌裸鼠原位种植瘤治疗目的:体内实验探讨MicroR-647/SRF/MYH9轴在胃癌裸鼠原位种植瘤转移的影响,以及CCG-1423和agomir-647对肿瘤的治疗效果。方法:胃癌裸鼠原位种植瘤模型构建、CCG-1423和agomir-647药物干预、以及免疫组化、HE染色等。结果:MicroR-647通过SRF/MYH9轴有效抑制胃癌裸鼠原位种植瘤转移;联合CCG-1423和agomir-647可有效抑制原位种植瘤模型的胃癌转移。通过上述研究,我们得到结论:胃癌miR-647表达下调且与转移相关。miR-647靶向结合SRF mRNA的3’非翻译区,抑制SRF表达;SRF结合MYH9启动子的CArG box,促进其表达,从而促进胃癌侵袭与转移。CCG-1423可抑制SRF介导的MYH9表达。联合使用CCG-1423和agomir-647可有效抑制裸鼠原位种植瘤模型的胃癌转移。本研究的创新之处:证实miR-647/SRF/MYH9轴与胃癌转移相关性。发现联合使用CCG-1423和agomir-647抑制裸鼠原位种植瘤模型的胃癌转移,为临床实践提供新思路。