百合不同外植体再生植株与LfMADS基因转化的研究

来源 :中国农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:clarkesg
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为了建立百合的再生体系,分别以东方百合‘提拔’和新铁炮百合‘雷山1号’的叶片、茎段、小鳞片、花丝和花梗为外植体,设计不同的激素对比,探索不同外植体最适宜的再生途径。试验结果表明:‘雷山1号’的叶片适合通过器官间接发生途径再生,最适宜的培养基是:MS+NAA 1.5mg/L+6-BA 0.5mg/L;而‘提拔’的花丝和小鳞片适合通过器官直接发生途径再生,最适宜的培养基分别是:MS+NAA 1.0mg/L+6-BA 0.5mg/L和MS+NAA 1.0mg/L +6-BA 0.1mg/L。另外,‘霄山1号’的茎段和‘提拔’的花梗分别能在MS+NAA 0.2mg/L+6-BA 1.0mg/L和MS+NAA 1.0mg/L+6-BA 0.5mg/L以器官间接发生途径和器官直接发生途径再生。花丝取材以花苞浅绿色、8~10cm时为最好,对地下鳞茎进行最初的培养时加入100mg/L Carb有良好的抑菌效果。 为了优化农杆菌介导的百合遗传转化体系,以东方百合‘提拔’的花丝为受体,研究了Kan筛选浓度、外植体预培养、共培养时As浓度和共培养时间对遗传转化的影响。结果表明:适宜的Kan筛选浓度为125mg/L,花丝预培养1w有利于转化,共培养时宜添加150μmol/L的As,最佳共培养时间是3d。 为了确认已发生表型变异的烟草为转基因烟草,对其自交一代的DNA进行了PCR-Southem检测。结果证实了外源基因已经插入烟草基因组.并发现两个外源基因LfMADS1和LfMADS3在稳定遗传的基础上发生了基因分离。 分析目前尚未得到转基因百合的原因.主要是因为选择了直接分化的花丝作为受体,转化效率太低而且容易出现假阳性不定芽。所以建议在接下来的试验中:一、应该选择合适的基因型来建立百合(胚性)愈伤组织受体系统;二是应该采用更直观、更快捷的基因转化检测手段,如利用Gus基因瞬时表达或Gfp基因荧光显色来判断转化效率。
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