维生素B及植物激素分析检测的新方法研究

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维生素B作为人体代谢过程中所必需的一种微量有机化合物,主要包括硫胺素(B1)、核黄素(B2)、烟酸(B3)、遍多酸(B5)、吡哆醇和吡哆醛(B6)、叶酸(B9)、生物素(B8)和钴胺素(B12)。它们通常以辅酶的形式参与蛋白质、内糖和脂肪的代谢,当体内缺乏某种维生素B时,其相应的功能将会受阻,严重缺乏时会导致一系列疾病。人体内不能自主合成维生素B,需要从日常饮食和补充类药物中获得,但医药市场监管制度尚不完善,存在一些药品标注值与实际含量严重不符的现象。这就急需建立一种方法检测维生素B补充剂中多种维生素B的含量,来确保人们在服用类似补充剂的同时获得足够的维生素B,保证机体的健康运转。色谱技术由于具有操作简单、重复性好、灵敏高、分析速度快等优点而得到广大分析工作者的青睐,因此我们建立了一种维生素B补充剂中多种维生素同时分析的HPLC方法,该方法具有简单、快速、可靠等优点,能够较好的满足实际样品分析的需求。植物激素作为植物体内调控植物生长的一类痕量有机化合物,对植物体内的新陈代谢起着至关重要的作用。按照作用和功能不同,植物激素可分为生长素、细胞分裂素(CK)、赤霉素(GA)、脱落酸(ABA),多胺、乙烯、茉莉酸、水杨酸和油菜素内酯。与维生素B不同的是植物激素可以在植物体内自主合成,但由于植物激素“量微高效”的特点,单纯利用HPLC很难在植物体内直接检测到植物激素,因此对植物体内植物激素的定性定量分析成为植物研究的瓶颈。基于以上问题,我们建立了一种基于SiO2@GO复合材料的分散固相萃取(dSPE)样品前处理方法,通过对植物激素高效净化和富集,建立了一种基于HPLC技术高效、灵敏、快速、可靠分析植物激素的新方法,实现了对拟南芥等植物中多种植物激素的同时定性和定量分析。本论文具体研究内容如下:1.利用维生素B1、B2、B3、B6标准品优化HPLC检测条件,采用ZORBAX Eclipse Plus C18(4.6 mm×100 mm,3.5μm)反相色谱柱,流动相为乙酸盐缓冲液(乙酸调节pH=3.22)和甲醇,选择不同比例混合溶液进行梯度淋洗,进样量5μL,检测波长为270nm。四种维生素B在浓度为0.8400μg/mL的范围内,相关系数r为0.99880.9999,检出限为0.050.40μg/mL,加标回收率在85.6%116.0%之间,相对标准偏差均低于0.33%,该方法实现了对片剂维生素B片中维生素B1、B2、B3和B6的准确测定。2.制备SiO2@GO纳米复合材料。本实验采用Hummers法制备GO,并成功的将其包覆在按氨基改性的SiO2表面,材料经过SEM、TEM、UV等一系列大型仪器的表征,结果表明SiO2@GO复合材料已成功合成。将已制备的GO复合材料作为dSPE萃取剂,应用到目标分析物吸附性能的研究,探索最佳料液比、pH值、吸附和解吸时间、解吸温度以及解吸溶剂对吸附性能的影响,实验结果表明本实验建立的dSPE方法具有良好的稳定性和重现性,萃取效率均在80%以上,富集倍数达100多倍,可用于痕量分析物的提取富集。3.本实验采用SiO2@GO纳米材料作为固相微萃取填充剂建立了dSPE-HPLC分析方法,对拟南芥、桃子、黄瓜等植物中3-吲哚乙酸(IAA)、脱落酸(ABA)、3-吲哚丁酸(IBA)、萘乙酸(NAA)四种植物激素进行检测。以Eclipse XDB-C8(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,甲醇∶水(乙酸-乙酸铵缓冲液)=70∶30(pH值3.22)作为流动相,检测波长为280 nm的条件下测定四种植物激素含量,并利用HPLC-MS对拟南芥及其培养液中的NAA进行定性分析。试验结果表明:四种植物激素在0.550.0μg/mL范围内线性关系良好,相关系数r≥0.9999,最低检出浓度为0.030.05μg/mL,试样在5.0、10.0、20.0μg/mL的3个添加水平下的平均回收率在91.8%106.9%之间,相对偏差在0.1%0.7%之间,结果显示:相对于未经SiO2@GO纳米材料富集萃取的样品分析,该检测方法的灵敏度能够提升10-100倍,实现了植物中目标植物激素的痕量分析。
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