脂类是组成细胞的重要组成成分，它在生物体维持正常的新陈代谢和生殖过程中，起着至关重要的调节作用。精子作为生物体中一种特殊的细胞，脂类在构成精子的结构及细胞功能的完整性上发挥着不可或缺的作用。精子膜脂类是构成精子细胞膜液态镶嵌结构的主要成分，与维持成熟精子的生物膜稳定有密切关系，同时也为受精而建立必要的分子构型。另外，通过对哺乳动物精子冷冻前后膜脂质的检测发现，精子膜脂质对精子活力的改变有重要作用。　　通过对哺乳类动物精子的研究发现，精子细胞中所含有的脂类主要由磷脂、中性脂、糖脂三部分组成，不同种类动物精子细胞脂类组成和含量存在差异;相同种类动物的精子细胞脂类在不同时期和精子不同部位也存在差异。　　糖脂分为鞘糖脂（如脑苷脂，神经节苷脂）和甘油糖脂（如单半乳糖基二酰基甘油、双半乳糖节日酰基甘油）。神经节苷脂(ganglioside)是大多数哺乳动物细胞膜的组成成分，是大脑形成记忆的最重要物质。神经节苷脂因其最早被发现于神经节细胞而得名，是一类含唾液酸的鞘糖脂，是由亲水的寡糖链和亲脂的神经酰胺两部分组成。　　神经节苷脂（Ganglioside，简称GM）是一种复合糖脂，存在于哺乳动物细胞，特别是神经元细胞的胞膜中，是神经细胞膜的天然组成部分。神经节苷脂参与神经元的生长、分化和表型的表达以及细胞迁移和神经生长锥的定向延伸，具有神经保护和神经修复双重作用，能从多个病理生理环节发挥神经保护作用，对多种临床上的神经损伤有很好的修复作用。　　神经节苷脂的功能大致可归纳为以下几种:1.促进神经细胞及大脑组织的正常发育，防治脑瘫等疾病;2.修复损伤神经及大脑组织，防治脑中风;3.增强记忆功能;4.延缓神经细胞的衰老，防治帕金森、老年痴呆等疾病。　　但是神经节苷脂在脑组织中的含量较低，现有的分离提纯方法大多步骤繁多，过程太过复杂，周期也较长，成本较高，从而导致神经节苷脂类药物价格昂贵，因此探索一种简便、精炼的提纯方法，降低生产成本，具有非常重要的意义。　　本实验主要以生物黄颡鱼的精子为实验材料，首先建立了用柱前衍生-高效液相色谱法检测鱼类精子中GM1（神经节苷脂）含量的的方法。具体做法是鱼类精子样品经氯仿-甲醇(1∶1)萃取再经过对溴苯甲酰甲基溴衍生处理后，用HPLC-UV测定。然后检测了鮸鱼、大黄鱼、黄姑鱼、孔雀鱼、鲤鱼和黄颡鱼这六种鱼类精子中冷冻前后神经节苷脂含量并做分析。　　鱼类精子中神经节苷脂含量测定方法的建立。本实验在大量阅读神经节苷脂含量测定的文献以后，再次优化检测方法。本文用超声破碎的方法对精子细胞进行破碎，然后通过两种不同的有机溶剂萃取法进行提脂，然后经过对溴苯甲酰甲基溴处理以后，氮吹干，用HPLC-UV测定。通过对流动相的组成，前处理条件，检测波长等方面的筛选，最终确定神经节苷脂的检测的方法是:每1ml精子悬液（精子浓度1.0×108个/ml左右）中加入2ml三氯甲烷，2ml甲醇，然后用超声波破碎仪对精子细胞进行破碎，具体操作条件是，样品体积1ml的情况下，输出功率为40％，超声时间为4×15s，间隔时间为30s。这里需要注意的是，在超声的过程中，必须保证样品置于冰水混合浴中，这是为了防止温度过高而将脂类氧化。超声结束后，加入1ml三氯甲烷溶液，充分混匀后。最后加入1ml甲醇震荡30s，静置清晰分层后取上层有机相置于具塞玻璃试管中。　　神经节苷脂样品的衍生及检测:将经过上述处理所得的提取液用氮吹仪在氮气流中缓慢吹干，然后用移液枪加入1ml对溴苯甲酰甲基溴的二甲基甲酰胺溶液，盖上试管塞，于60摄氏度水浴中反应60min，溶液经过0.45μm有机相的滤膜过滤，液相色谱进样进行分析。分析的条件如下:　　Extend-C18(4.6×100 mm，5μm)反相柱，甲醇-乙腈(80∶20)等梯度洗脱，流速1.0ml/min，柱温25摄氏度，检测波长:260nm，进样量20μl　　鮸鱼、黄姑鱼和大黄精子冷冻前后脂质检测及与低温冷冻的相关性。采用优化后的方案对上述鱼类精子样品进行检测。鮸鱼，黄姑鱼，和大黄鱼精子中鲜精的神经节苷脂的含量分别是14.1、31.09、25.24μg/108 sperm，采用各自适宜的冷冻方案冷冻以后，神经节苷脂的含量分别变为9.14、8.01、14.32μg/108sperm。鲤鱼鲜精中神经节苷脂的含量为35.24μg/108 sperm，采用适宜的冷冻方案冷冻以后，神经节苷脂的含量变为26.01μg/108sperm。黄颡鱼和孔雀鱼鲜精中神经节苷脂含量分别为14.35、13.13μg/108sperm，对它们采取分别采取较好的冷冻方案后，神经节苷脂的含量变为8.39、10.41μg/108sperm;采取较差的冷冻方案冷冻以后，神经节苷脂的含量变为7.95、9.92μg/108sperm。