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目的:探讨贝伐单抗对脑胶质瘤细胞的抑制作用以及脑胶质瘤细胞对贝伐单抗产生耐药性的发生机制。方法:体外培养脑胶质瘤细胞(U87-MG细胞系)。①使用不同浓度的贝伐单抗来处理U87-MG细胞,处理时间持续24小时或者48小时,随后使用MTT试剂盒检测不同浓度贝伐单处理条件下U87-MG细胞的存活率,用以检验贝伐单抗对脑胶质瘤细胞的直接抑制效应;②使用不同浓度的贝伐单抗处理U87-MG细胞48小时,使用Annexin V-FITC/PI试剂盒及流式细胞仪检测细胞凋亡情况,用以检验贝伐单抗对脑胶质瘤细胞的促凋亡效果;③使用不同浓度的贝伐单抗处理脑胶质瘤细胞48小时后,直接裂解细胞并进行Western Blot检测自噬过程中标志性蛋白:LC3B-I、LC3B-II和SQSTMI(p62)表达水平变化,以及LC3B-II/LC3B-I比例变化,用以验证贝伐单抗是否诱导脑胶质瘤细胞产生自噬;④U87-MG细胞在不同浓度贝伐单抗的存在的的情况下培养48小时,裂解细胞,处理样品和总蛋白定量后,进行丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot检测。使用靶向Akt S473位点和T308位点磷酸化的抗体来检测蛋白激酶Akt的磷酸化情况,使用针对mTOR直接底物p70S6K T389位点磷酸化的抗体来检测p70S6K的磷酸化水平,用以验证贝伐单抗是否通过抑制Akt-mTOR信号通路诱导脑胶质瘤细胞产生自噬;⑤联合使用贝伐单抗和氯喹来共同培养细胞,将细胞裂解并进行样品的处理和总蛋白定量,用丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot检测LC3B-II/LC3B-I和SQSTM1(p62)表达水平变化,用以验证氯喹是否能够显著抑制贝伐单抗诱导的脑胶质瘤细胞自噬;⑥联合使用贝伐单抗和氯喹处理脑胶质瘤细胞U87-MG,用AnnexinV/PI染色细胞并进行流式细胞检测,分析不同药物处理条件下肿瘤细胞的凋亡情况。结果:①贝伐单抗可以直接有效地抑制脑胶质瘤细胞的增殖,而且该抑制效果具有明显的剂量和时间依赖性;②贝伐单抗能够引起较高水平的脑胶质瘤细胞凋亡,凋亡结果依然呈现出一定水平的剂量依赖性,高浓度的贝伐单抗处理下,胶质瘤细胞产生耐药性;③贝伐单抗处理后,脑胶质瘤细胞呈现逐渐降低的LC3B-I,逐渐升高的LC3B-II,以及上升的LC3B-II/LC3B-I比例和明显减少的SQSTM1(p62)表达水平,表明贝伐单抗处理能够诱导脑胶质瘤细胞脑胶质瘤细胞产生自噬,而且自噬的产生也具有浓度依赖性特征;④随着贝伐单抗浓度的提高,S473位点和T308位点的磷酸化水平都出现了显著地下调,p70S6K T389位点的磷酸化水平也出现了显著地下调。表明Akt-mTOR信号通路受到抑制从而产生细胞自噬;⑤贝伐单抗联合氯喹能够显著地提高LC3-Ⅱ和SQSTM1(p62)的蛋白量,显示出细胞自噬可以被氯喹显著抑制;⑥联合贝伐单抗和氯喹处理细胞,可以诱导更高水平的细胞凋亡。结论:除了抑制新生血管生成外,贝伐单抗能够直接抑制恶性胶质瘤细胞的增殖,促进恶性胶质瘤细胞的凋亡。高浓度的贝伐单抗能够诱导胶质瘤细胞产生耐药性,这种耐药性是通过抑制Akt-mTOR信号通路而促进肿瘤细胞自噬来实现的,自噬抑制剂能够减弱肿瘤细胞对贝伐单抗所产生的耐药性。