近年来,牛支原体在全国呈现流行趋势,而宁夏关于牛支原体的病例也呈现逐年上升趋势,本研究对宁夏地区牛支原体开展了分离鉴定及流行病学的调查,并对牛支原体的药敏试验和培养基的改良进行了探索,结果表明:(1)2013年11月宁夏某奶牛场从其它奶牛场引进部分奶牛,数周内不断出现成年奶牛和犊牛发生疑似牛支原体感染的疾病,为确诊病原,对无菌采集的病料样品进行细菌和支原体培养及分离,通过革兰氏染色、菌落形态观察,结果显示:主要分离到三株支原体菌株,分别命名为NP1,NP2,NP3,对三株支原体分离株使用牛支原体特异性PCR鉴定和16S rRNA序列比对,并使用N-J法对三个分离株的16S rRNA序列与支原体代表菌株建立系统发育树,细菌分离到大肠杆菌、链球菌、巴氏杆菌等,结果证实引起该场此次流行的主要病原为牛支原体,并伴有其它细菌的混合感染。(2)牛支原体在北美、欧洲等多个国家和地区呈现流行性,自2008年我国首次报道牛支原体引起的肺炎至今,全国多个省份相继报道牛支原体在本地区呈现流行性,为掌握宁夏地区奶牛场和肉牛场牛支原体的感染状况,对2013年11月至2014年12月间采集的宁夏地区1380份血清和89份组织样品,分别采用比利时牛支原体间接ELISA检测试剂盒和牛支原体特异性PCR检测血清中的牛支原体抗体水平和组织样品中牛支原体uvrC特异性基因,结果显示:在检测的1380份牛血清中,检出阳性数319份,阳性率为23.12%,在检测的89份组织样品中,检测出阳性数53份,阳性率为59.55%。(3)由于牛支原体自身合成其所需营养物质能力较弱,体外培养对其所需要的营养物和培养条件较高,且培养基成本昂贵,为了提高牛支原体的培养效率,探究了牛支原体在液体培养基中生长的最适pH值、最适血清浓度和最适酵母浸出液浓度,为了进一步提高牛支原体Thiaucourt’s培养基的培养效率和抑制杂菌生长的能力,在该培养基中加入脱氧核糖核苷酸钠、牛心汤和牛肺消化液及抑制革兰氏阳性菌生长的结晶紫,使用菌体蛋白测定法进行测定,结果证实:在改良Thiaucourt’s培养基中添加的以上物质可以提高牛支原体的生长效率,同时提升了培养基抑制杂菌的能力,改良的Thiaucourt’s液体培养基接种牛支原体后变色时间由原来最快2 d变为1 d,改良的Thiaucourt’s固体培养基接种牛支原体后在显微镜下可观察到菌落的时间由原来最快3d变为2d天。(4)牛支原体在国内发病和流行情况呈现逐年上升趋势,由于抗生素的滥用导致牛支原体的耐药性增强,常用药敏试验对牛支原体敏感性检测效果差,且程序复杂、实验时间长。为此本研究挑选出氧化苦参碱、苦参碱、苦参总碱,采用微量稀释法测定牛支原体对这三种生物碱的最低抑菌浓度(MIC),并对人型支原体鉴定药敏试剂盒做了改进,将试剂盒中原有液体培养基换用牛支原体改良的Thiaucourt’s液体培养基,同时应用于牛支原体的初步鉴定及药敏试验,实现了牛支原体鉴定和药敏实验同步进行,提升了该病的诊断和治疗效率。