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目的:研究炎性环境下LPS对肠神经胶质细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法:1.体外培养大鼠肠神经胶质细胞株(enteric glial cells,EGCs),采用免疫荧光染色法检测EGCs中纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)及钙结合蛋白S-100β表达情况;2.将EGCs分为空白对照组、TNF-α+IFN-γ组、LPS+TNF-α+IFN-γ组、TNF-α+IFN-γ+RET受体抑制剂组、LPS+TNF-α+IFN-γ+RET受体抑制剂组,采用MTT比色法、BrdU法检测EGCs增殖活力;TUNEL染色法、Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术、Hoechst33342染色法检测EGCs凋亡情况;Caspase-3活性试剂盒检测EGCs的Caspase-3相对活性;蛋白免疫印迹法检测RET、PI3K、AKT、p-AKT蛋白的相对表达水平。结果:1.免疫荧光染色结果显示本实验所用细胞株可同时表达GFΑP及钙结合蛋白S-100β;2.MTT结果显示,与正常对照组相比,不同浓度的LPS(100,200,400μg/mL)抑制EGCs增殖(P<0.05),不同浓度的TNF-α(50,100,200ng/mL)+IFN-γ(100ng/mL)明显降低EGCs生存率(P<0.05)。MTT及BrdU结果显示,与TNF-α(50 ng/mL)模型组对比,LPS处理使细胞增殖能力显著降低(P<0.05)。同时,在TNF-α+IFN-γ组及LPS+TNF-α+IFN-γ组中,RET受体抑制剂处理后,EGCs细胞增殖能力均进一步降低(P<0.05)。3.TUNEL染色结果和流式细胞术(Annexin V-FITC/PI双染法)检测结果均显示各组间EGCs凋亡无显著变化,组间无统计学差异(P>0.05)。Hoechst 33342细胞凋亡形态学观察结果显示各组中无明显核偏移现象,凋亡小体数目无明显改变。Caspase-3活性试剂盒检测结果显示各组间Caspase-3的相对活性无显著变化,差异无统计学意义(P>0.05)。4.蛋白免疫印迹法检测结果显示:与正常对照组相比较,TNF-α+IFN-γ组EGCs中RET、AKT、p-AKT蛋白相对表达量下调(P<0.05)。与TNF-α+IFN-γ模型组对比,LPS处理使EGCs中RET、AKT、p-AKT蛋白相对表达量降低(P<0.05)。同时,对于TNF-α+IFN-γ组及LPS+TNF-α+IFN-γ组,RET受体抑制剂处理后EGCs中RET、AKT、p-AKT蛋白相对表达量均进一步降低(P<0.05)。各组中EGCs细胞内PI3K的表达水平并无显著的差异(P>0.05)。结论:1.本实验所用细胞株经鉴定为大鼠肠神经胶质细胞株。2.炎性环境下LPS可抑制EGCs增殖,其机制可能与抑制RET及PI3K/AKT信号通路有关;炎性环境下LPS对EGCs凋亡无明显影响。