论文部分内容阅读
‘东魁’杨梅(Myrica rubra cv.Dongkui)源于实生变异,单果重量超出同类果实的1-5倍,但交替结果、裂果、腐烂、抗枯枝病的问题较其它品种更为严重。倘若有综合性状优越于母本的种质,并对其变异机理进行系统研究,具有重要的理论和应用价值。本研究以两个‘东魁’杨梅变异体DB1、DB2为供试材料,从形态学、细胞学、转录组学等方面比较了它们与野生型东魁的差别并进行系统分析。主要研究结果如下：1、利用形态检测法对供试对象的花、叶、枝、果等组织器官进行检测。分析供试材料花期,DB1分别早于DB23d、迟于东魁3d左右。两个变异材料的花须、花萼、花序、花枝、叶片、果实、气孔与东魁有显著差异。成熟期DB1和DB2单果质量分别为25.3g、28.3g,大于东魁为20.5g。流式细胞仪倍性分析和染色体数目表明,DB1和DB2均为四倍体(2n=4x=32),东魁(DK)为2n=2x=16,即为二倍体。2、利用iPBS和ScoT分子标记,检测31份杨梅材料及与‘东魁’的亲缘关系。在78条引物中筛选38条,可重复条带452条,多态性较好的401条,多态率为88.7%。根据PCR扩增结果,它们的遗传相似系数分布在0.55-0.94,大部分集中在0.63-0.80之间,以0.70为阈值,可将其分为3组。DB1、DB2的GS分别为0.77、0.80,亲缘关系较近。细叶高庄与贾宅早的GS均为0.94,可能是同物异名。临海阳平梅GS值为0.55,亲缘关系最远。3、利用TR-FRET法检测两个变异材料果实中Cy-3-glu、总酚、类黄酮等物质含量。结果显示,成熟期Cy-3-glu含量最高,DB1、DB2的含量显著高于‘东魁’。进一步对DB1、DB2和‘东魁’分别在两个发育阶段(幼果、成熟果)的果肉RNA构建6个文库,进行RNA-Seq,分别获得3708809(DB1-1)、3606358(DB1-2)、3575119 (DB2-1)、3787895(DB2-2)、3610954(东魁1)、3594742(东魁2)条有效序列。与参考数据库比对,分别鉴定了28407(DB1-1),28040(DB1-2),28043(DB2-1),22256(DB2-2),28683(东魁1),27351(东魁2)个基因。以FDR_<0.001且倍数差异在2倍以上的基因定义为差异基因,DB1与‘东魁’间差异表达基因有281个,其中123个和158个基因分别上调和下调表达；DB2和‘东魁’间差异表达的基因有47个,其中有8个和390个基因分别上调和下调表达。利用Real-time PCR分析8个功能基因(MrUFGT、MrF3’H、MrDFR1、MrCHS、MrCHI、MrF3H、MrDFR2、MrANS)在3个供试材料的果实不同发育时期的表达,发现它们在不同时期基因调控的作用不同,差异显著。