论文部分内容阅读
背景 1，25（0H）2D3（1，25D）是维生素D3的活性形式，通过其受体VDR发挥作用。近来发现它除了能调节钙代谢外，还能抑制很多肿瘤细胞的增殖，促进肿瘤细胞分化，在体外能有效地降低乳腺癌雌激素依赖型和非依赖型细胞的生长并促使其分化，从而减少肿瘤的体积和数量。但对其是抑制还是诱导凋亡的观点不一，对其机制的研究较少。 目的 本研究用雌激素受体阳性的乳腺癌细胞株MCF-7，在1，25D作用后观察其细胞形态学改变，判断凋亡是否发生；通过检查凋亡途径中一些凋亡相关蛋白VDR、ER、Bc 1-2、Bax的表达，以探讨1，25D作用于乳腺癌细胞的机制。 方法 在体外培养条件下，用不同浓度(10-10、10-9 、10-8、10-7mol／L)的1，25D作用人乳腺癌细胞株（MCF-7，雌激素受体阳性）24h、48h、72h、96h。应用MTT比色法分析其细胞生长抑制作用，流式细胞仪测定细胞周期分布和凋亡率，HE、荧光原位检测细胞凋亡的方法辅助检测细胞凋亡率，透射电镜观察凋亡细胞的超微结构。用免疫组织化学SP方法检查凋亡相关基因蛋白VDR、ER、Bc 1-2、Bax的表达。 结果 （1）1，25D在10-9mol／L～10-7mol／L浓度范围内抑制体外培养的MCF-7细胞生长，并具有时间、剂量依赖性，10-9mol／L作用72小时后可抑制细胞生长，而10-7mol／L在24h后即可抑制细胞生长，96小时抑制率达42.92％。（2）HE，流式细胞术，荧光原位检测细胞凋亡安徽医科大学硕士学位论文的方法发现10一7m。1/Ll，25D作用MCF刀细胞48h后即可诱导细胞凋亡;正常生长的MCF一7细胞72小时凋亡率3.2%，10一gmol/L、10一smol/L、10一，mol/Lx，25D作用于MCF一7细胞72h后细胞凋亡率分别为8%，19.4%，27.5%。1，25D诱导MCF一7细胞凋亡的作用具有时间、剂量依赖性。（3） HE染色见凋亡细胞胞浆红染、染色质浓缩、核偏位呈“月牙形”;荧光原位检测细胞凋亡方法发现凋亡细胞呈现明亮的绿色;透射电镜显示10-7m。z/L「z，25n作用48h，MeF一7细胞呈现早期凋亡细胞特征。（4）10一7m。1儿l，25D作用24h，10一gm。1/Ll，25D作用72h后出现voR上调，ER下调;1住7m。l八Jx，25D作用48h，一。一8 mol/Lz，25D作用72h出现BCz一2明显下调，BoLX略升高致Bcl一2/Bax的比值显著下降，且这些蛋白的改变也具有时间及剂量依赖性。结论能与1，25D在一定浓度范围内可诱导MCF一7细胞凋亡，其作用机制可VDR上调及ER、Bel一2下调有关。