【摘 要】
：
Src同源区2(SH2)蛋白酪氨酸磷酸酶2(Shp-2)是一种非受体酪氨酸磷酸酶,在各种脊椎动物的细胞中普遍表达,参与细胞的分化等多种生物学功能的调控及信号转导过程。作为原癌基因P
论文部分内容阅读
Src同源区2(SH2)蛋白酪氨酸磷酸酶2(Shp-2)是一种非受体酪氨酸磷酸酶,在各种脊椎动物的细胞中普遍表达,参与细胞的分化等多种生物学功能的调控及信号转导过程。作为原癌基因PTPN11编码的酪氨酸磷酸酶,Shp-2的表达及其活性改变已被证明与造血细胞的恶性增生、儿童白血病及多种人的恶性肿瘤疾病有关。然Shp-2在禽类疾病中所起的作用研究鲜见报道。为探究鸡源Shp-2功能及其在相关疾病中作用,本研究在克隆、表达了鸡源Shp-2基因的基础上,研制出了针对鸡Shp-2的特异性单克隆抗体,且利用CRISPR-Cas9技术建立了稳定敲除Shp-2的鸡肝细胞系。1、鸡Shp-2基因克隆及表达为获得用于制备抗鸡Shp-2单克隆抗体的免疫原和筛选抗原,本研究将Shp-2基因克隆至线性化载体pGEX-6p-1和pcDNA3.1上,成功构建了 Shp-2原核表达载体pGEX-6P-1-Shp-2 及真核表达载体 pcDNA3.1-Shp-2。将获得的阳性重组子pGEX-6P-1-Shp-2转化至Rosetta感受态中,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析发现GST-Shp-2蛋白可以以包涵体形式以及可溶性形式表达。Western blot分析证明重组蛋白GST-Shp-2具有良好的抗原反应性。利用GST琼脂糖凝胶柱纯化了可溶性形式表达的GST-Shp-2蛋白,为后续小鼠免疫及抗鸡Shp-2单克隆抗体的制备提供了生物材料,奠定了基础。2、抗鸡Shp-2单克隆抗体的制备及特性鉴定为获得抗鸡Shp-2单克隆抗体,本研究将纯化的GST-Shp-2免疫BALB/c小鼠,以转染pcDNA3.1-Shp-2的DF-1细胞为筛选抗原,通过IFA筛选出两株能够分泌出抗鸡Shp-2单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为3A10和3G12,亚类均为IgG1,轻链均为κ链。3A10和3G12的IFA荧光效价测定均为1:12800,且Western blot试验表明这两株单抗与内源性和外源性表达的Shp-2均能发生特异性反应。通过对单抗3A10和3G12的初步表位鉴定表明,这两株单抗的表位均跨越了 NSH2和CSH2两个重要功能结构域。两株抗Shp-2单克隆抗体的获得为研究Shp-2的生物学功能提供了材料。3、敲除Shp-2的鸡肝细胞系的建立为探究Shp-2与禽类疾病的关系,本研究利用CRISPR/Cas9技术建立了敲除Shhp-2基因的LMH细胞系。首先将设计的针对Shp-2基因的5条sgRNA克隆至lentiCRISPRv2载体,将重组质粒转染LMH细胞,嘌呤霉素筛选。通过Western blot技术检测发现,sgRNA-3的敲除效果最好。通过将转染lentiCRISPRv2-sgRNA-3的LMH细胞单克隆化,Western blot检测单克隆细胞株的Shp-2的蛋白水平,最后获得稳定敲除Shp-2的LMH细胞系,命名为 LMH-KO-Shp-2-3、LMH-KO-Shp-2-6、LMH-KO-Shp-2-11,为研究 Shp-2 在禽类疾病中的作用提供有力工具。
其他文献
转子的碰摩是一种常见的故障,碰摩可能引起轴的扭转振动和弯扭耦合振动,弯扭耦合振动有可能导致振动响应产生分岔、混沌甚至失稳。因此对碰摩转子的弯扭耦合振动进行研究,可以为转子碰磨弯扭耦合振动分析和故障诊断提供理论指导与应用参考。本文针对转子碰摩引起的弯扭耦合振动动力特性进行了研究,主要研究内容及成果如下:(1)基于梁单元节点五自由度模型,推导了碰摩转子弯扭耦合振动的梁单元节点运动微分方程;利用节点运动
在农业设施中,限制设施作物生长和产量的关键性影响因素之一是设施土壤次生盐渍化。番茄是农业设施中栽培最为广泛的一种蔬菜作物,设施内的土壤次生盐渍化会对番茄的各个方面产生影响,导致产量和果实品质下降。因此,提高番茄的盐适应性尤为重要。GSNO(S-亚硝基谷胱甘肽)是一种-亚硝基硫醇类化合物,是生物体天然存在的一氧化氮(NO)供体。内源GSNO参与多种信号传导和在植物对非生物胁迫防御应答上发挥重要作用。
胃癌具有早期症状不明显和易发生转移的临床特点,确诊时也多处于中晚期。晚期胃癌患者五年生存率低于30%,然而,早期胃癌患者经手术后五年生存率最高可达95%,因此,胃癌的早期精准诊断和手术切除是降低胃癌死亡率的关键手段。然而,胃癌现有临床检测方法灵敏度和特异性低,过多依赖医生经验,易造成肿瘤漏诊。近年来,近红外(Near infrared region,NIR)荧光成像技术具有灵敏度高、特异性高、成本
现代战争在科技迅猛发展的今天早已脱离了单个武器和单个武器的对抗阶段,而进入武器系统之间和装备体系之间的对抗阶段,未来战争更是呈现出智能化的武器集群之间和网络系统之
目前经济全球化呈现出不断加速的发展趋势。经济全球化给世界带来的意义有目共睹,它不仅仅影响了世界经济格局的变化,推动了全球经济的发展,还对世界各个国家,各个地区的文化,社会等各个方面都产生了很重要的影响。就中国而言,中华民族一直以来都是一个崇尚“德行”的民族,德育教育在中国的教育体系当中一直都占有着很重要的地位,自世界经济一体化之后,中国的德育教育也被带来了新的思想和新观念,中国德育教育的发展方式也
在西班牙动荡的政治环境下,维克多·艾里斯(Víctor Erice)是“新西班牙电影”中最杰出的导演之一,他凭借处女作《蜂巢幽灵El espíritu de la colmena》(1973)获得了国际的关注,赢得了众多奖项。本文将“电影作者论”作为研究方法,把西班牙社会从独裁到民主的变化作为历史背景,以维克多·艾里斯的三部长片电影作为文本,对他的电影作品进行文本细读、深入分析与研究。从他独特的视
水稻是我国的重要粮食作物,近些年来水稻生产全程机械化大力推进,水稻收获机械化水平迅速提高。收割机滚筒堵塞是收获过程中的一种常见故障。其出现受水稻的品种、成熟度、含水率、生长状况等因素以及田块状态的影响,在争抢农时的收获季节,堵塞不仅对收获机械的使用寿命造成影响,而且严重降低收获效率。收割机防堵及堵塞预警研究是当前收割机性能研究中的一个重要方向。为此,本文对一种脱粒滚筒喂入量测量系统进行了研究。主要
辣椒作为重要的经济作物在我国有广泛需求,但辣椒种植过程中极易遭受病虫害的威胁,广泛使用多菌灵等杀菌剂防治辣椒炭疽病等真菌性病害。然而,我国农药利用率远低于欧美发达
电机拖动的风机、泵类等离心式负载的用电量占我国总用电量的30%以上;离心式负载的轴功率与转速三次方成正比,即转速降低后,轴功率将呈三次方下降。因此,对离心式负载调速研究具有较大的理论意义与应用价值。通过分析对比现有调速方式的优缺点,提出一种基于异步电机笼型转子的调速型异步磁力耦合器(Speed Regulating Asynchronous Magnetic Coupler,SRAMC),具有轻载
目的构建适合临床老年科护士的痴呆护理教育知识体系,为制定针对性痴呆护理教育培训计划提供理论参考。方法1.根据检索策略检索国内外数据库,同时检索国际阿尔茨海默病协会等痴呆专业性网站,获得与痴呆护理教育有关的文献。2.在文献回顾的基础上,初步形成知识条目池,结合研究目的自行设计痴呆护理教育知识需求问卷,调查临床老年科护士的痴呆护理教育知识需求,初步形成知识体系框架。3.运用德尔菲法对初步拟定的函询问卷