【摘 要】
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本研究利用基因重组技术构建了人HER2/neu ICD真核表达载体pPICZα/HER2/neu ICO,电转化毕赤酵母X-33后,筛选出稳定高效的分泌表达HER2/neu ICD的工程菌株。经SDS-PAGE、West
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本研究利用基因重组技术构建了人HER2/neu ICD真核表达载体pPICZα/HER2/neu ICO,电转化毕赤酵母X-33后,筛选出稳定高效的分泌表达HER2/neu ICD的工程菌株。经SDS-PAGE、Western blot和离子交换层析纯化证明HER2/neu ICD与天然HER2/neu ICD有相同的理化性质。进而在80L发酵罐水平,进行了HER2/neu ICD表达条件的优化,建立了一种适合于大规模发酵和纯化HER2/neu ICD的方法。将HSP110与HER2/neu ICD结合成复合物,用HSP110-HER2/neu ICD复合物,HSP110-P789-797,HER2/neu ICD分别免疫小鼠,进行诱导特异性CTL的实验研究。结果表明:HSP110-HER2/neu ICD复合物比HSP110-P789-797,HER2/neu ICD更有效地促进T淋巴细胞分泌IFN-γ,诱导CTL特异性杀伤HER2/neu高表达的肿瘤细胞;对HER2/neu高表达的乳腺癌模型小鼠的治疗作用也明显优于HSP110-P789-797和HER2/neu ICD。本实验构建的重组HER2/neu ICD与HSP110结合的复合物是一种有潜力的肿瘤疫苗。本实验的创新之处在于:①首次在毕赤酵母中高效表达了HER2/neu ICD;②在80L发酵罐水平,建立了发酵和纯化HER2/neu ICD的方法;③证实将HER2/neuICD与HSP110形成复合物,可诱发机体强大的特异性免疫反应,用于HER2/neu高表达的肿瘤的免疫治疗。
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