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畜禽湿热泄泻证是西南地区夏秋季常见的一类病证,给养殖业带来了较大的经济损失。中医认为泄泻的病位主要在脾胃和大小肠,致病因素包括感受外邪,饮食所伤,情志失调,脾胃虚弱,脾肾阳虚等。但其主要致病因素为湿邪,即《难经》所谓“湿多成五泄”,湿邪导致脾运化失常,而发生泄泻。中医药治疗泄泻有较好的疗效,根据临床辨证论治所拟定的复方术苦芩具有清热解毒、燥湿止泻的作用,前期研究表明术苦芩颗粒(Zhukuqin granule,ZKQG)可有效防治仔猪湿热泄泻证。但其促脾健运的作用机制尚不清楚。本研究旨在通过建立大鼠湿热泄泻模型,并使用ZKQG对其进行治疗,以探讨ZKQG对湿热泄泻大鼠的临床治疗效果及促脾健运的作用机制,为ZKQG的临床应用提供一定的理论依据。1、探究了ZKQG对湿热泄泻模型大鼠治疗效果。通过“高糖高脂+高温高湿+番泻叶”的方法建立大鼠湿热泄泻模型,采用ZKQG治疗并观察大鼠的临床症状,测定血液中相关指标。结果显示,空白组大鼠被毛光亮,精神状态良好,采食与饮水正常,体态健康,体温,粪便,尿液与肛门情况均正常;模型组大鼠被毛蓬松,蜷缩懒动,食欲不振,肛门充血红肿或扩张,大便稀软或溏塞,尿液呈现深黄色等症状。给药5 d后,白头翁组、ZKQG高、中、低剂量组的有效率均为100%,治愈率分别为100%、100%、62.5%、50%。与空白组比较,模型组大鼠腹泻指数和血液RBC、HGB、PCV、PLT、PMN含量增加,脾脏指数和胸腺指数降低,血清IL-2水平逐渐降低。与模型组比较,白头翁组、ZKQG高、中、低剂量组大鼠腹泻指数和血液RBC、HGB、PCV、PLT、PMN含量降低,脾脏指数和胸腺指数增加,血清IL-2水平在给药3 d、5 d后均提高。说明ZKQG能有效治疗大鼠湿热泄泻证并提高机体免疫力。2、探究了ZKQG对湿热泄泻模型大鼠脾脏组织caspase-3、caspase-9水平的影响。制作并观察大鼠脾脏组织病理学切片,采用ELISA法检测其脾脏组织caspase-3、caspase-9水平。结果显示,与空白组比较,模型组大鼠脾脏细胞损伤严重,大量淋巴细胞凋亡,脾窦扩张,红细胞浸出,且caspase-3、caspase-9水平增高,差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,白头翁组和ZKQG高、中、低剂量组大鼠脾脏细胞损伤有所恢复,且caspase-3、caspase-9水平均降低,其中ZKQG高、中、低剂量的作用呈剂量依赖性。提示ZKQG能减轻湿热泄泻大鼠脾脏组织损伤,减少脾脏细胞病理性凋亡。3、探究了ZKQG对湿热泄泻模型大鼠脾脏组织MDA、SOD水平的影响。采用ELISA法检测大鼠脾脏组织MDA、SOD水平。结果显示,与空白组比较,模型组大鼠脾脏组织MDA水平增高,SOD水平降低,差异均极显著(P<0.01);与模型组比较,白头翁组和ZKQG高、中、低剂量组大鼠脾脏组织MDA水平均降低,SOD水平均增高,且ZKQG高、中、低剂量的作用均呈剂量依赖性。提示ZKQG能缓解脾脏细胞氧化应激损伤。4、探究了ZKQG对湿热泄泻大鼠脾脏细胞自噬相关蛋白的影响。采用ELISA法分别检测经ZKQG试验5 d、10 d和15 d后大鼠脾脏组织中LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、Beclin1、m TORC1、p-mTORC1水平。结果显示:试验5 d后,与空白组比较,模型组大鼠脾脏组织中LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、Beclin1水平和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、mTORC1/p-mTORC1比值均有增高的趋势,mTORC1和p-mTORC1水平有降低的趋势(P>0.05);与模型组比较,白头翁组和ZKQG高、中、低剂量组大鼠脾脏组织中LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、Beclin1水平和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、mTORC1/p-mTORC1比值增高,mTORC1和p-mTORC1水平极显著降低(P<0.01)。试验10 d和15 d后,与空白组比较,模型组大鼠脾脏组织中LC3-Ⅱ、Beclin1水平和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均极显著增加(P<0.01),LC3-Ⅰ水平和mTORC1/p-mTORC1比值均增加,mTORC1和p-mTORC1水平均极显著降低(P<0.01);与模型组比较,白头翁组和ZKQG高、中、低剂量组大鼠脾脏组织LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、Beclin1水平和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、mTORC1/p-mTORC1比值均降低,mTORC1和p-mTORC1水平均极显著增加(P<0.01)。说明ZKQG在一定程度内能促进湿热泄泻大鼠脾脏细胞自噬,也能抑制过度的脾脏细胞自噬。5、探究了ZKQG对湿热泄泻大鼠脾脏组织中mTOR、Akt、PI3K mRNA表达的影响。试验5 d、10 d和15 d后无菌采集大鼠脾脏,提取RNA,采用qRT-PCR法检测脾脏组织中mTOR、Akt、PI3K mRNA表达。结果显示,试验5 d后,空白组与模型组大鼠脾脏组织中mTOR、Akt、PI3K mRNA表达无显著差异(P>0.05);与模型组比较,白头翁组和ZKQG高、中、低剂量组大鼠脾脏组织中mTOR、Akt、PI3K mRNA表达均极显著下降(P<0.01)。试验10 d和15 d后,与空白组比较,模型组大鼠脾脏组织中mTOR、Akt、PI3K mRNA表达均极显著下降(P<0.01);与模型组比较,白头翁组和ZKQG高、中、低剂量组大鼠脾脏组织中mTOR、Akt、PI3K mRNA表达均增高。说明ZKQG能通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路,调节湿热泄泻大鼠脾脏细胞自噬,进而达到调节脾运化的作用。综上所述,ZKQG对湿热泄泻证大鼠有较好的治疗效果。ZKQG能通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路,调节湿热泄泻大鼠脾脏细胞自噬,以清除受损细胞器或蛋白,减少病理性凋亡,提高机体免疫,达到调节脾运化的作用。