斜带石斑鱼生长激素的促生长作用及胰岛素样生长因子Ⅰ在毕赤酵母中的表达

来源 :中山大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tanjuan1980
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鱼生长激素(fGH)是由鱼脑垂体间叶细胞分泌的用于调节鱼体生长发育的一种多肽激素。不少研究证明,基因重组的fGH与天然的fGH一样具有生物活性,通过口服能被鱼体吸收,具有很强的促生长作用。 本文分为两部分的内容:重组斜带石斑鱼GH对吉富罗非鱼的促生长作用和IGF-Ⅰ在毕赤酵母中的表达。首先是利用已构建的GH高效表达酵母菌株,其分泌的重组GH经硫酸铵沉淀后拌在鳗鱼粉状饲料里面,投喂吉富罗非鱼,历时八周,结果表达,重组GH能够明显地促进吉富罗非鱼的生长(p<0.01),到投喂实验结束的时候,组成型表达低浓度组、高浓度组和诱导型表达低浓度组、高浓度组的增重率分别比对照组高出100%、88.80%、67.30%和40.90%,说明所表达的重组GH具有生长活性。而且,无论是组成型表达还是诱导型表达,低浓度组的促生长效果都比高浓度组更加明显。投喂实验结束后,进一步用半定量RT-PCR分别分析外源GH对肝脏的IGF-ⅠmRNA和垂体的GHmRNA的表达量的影响,结果发现,实验组IGF-ⅠmRNA的表达量明显比对照组高(p<0.05),而GHmRNA的表达量则没有明显的差异(p>0.05)。从而证实了GH的促生长效果主要是通过IGF-Ⅰ而起作用。 为了进一步研究鱼类的GH-IGF-Ⅰ生长调控轴的作用机理,本文还构建和表达了斜带石斑鱼IGF-Ⅰ。为了提高重组IGF-Ⅰ的表达量,首先是对IGF-Ⅰ成熟肽进行酵母密码偏好性改造,在不改变其氨基酸序列的前提下,把稀有密码子全部替换成酵母中最常用的密码子。然后构建胞内和胞外表达载体,在酵母细胞中表达重组IGF-Ⅰ。同时,以未改造的IGF-Ⅰ作为对照,看看改造和未改造两者之间的表达量是否存在明显的差异。遗憾的是,由于时间关系,改造序列的IGF-Ⅰ的表达未能完成,只完成了未改造序列IGF-Ⅰ在毕赤酵母GS115中的表达。
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