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目的建立大鼠大脑中动脉栓塞模型,评价三七总皂苷对脑缺血再灌注后的大鼠神经功能的影响,通过透射电镜、纳米粒径分析、高通量测序、生物信息学方法等技术对组织来源外泌体及外泌体miRNA差异表达谱的进行分析,旨在为三七总皂苷治疗缺血性脑卒中提供试验依据。方法1.缺血再灌注大鼠动物模型的建立及标本采集:按照随机数字表法将50只大鼠分为假手术组,模型组,干预组;干预组按照给药剂量给药剂量的不同分为低、中、高剂量组。假手术组,模型组,低、中、高剂量组每组10只大鼠。线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型,假手术组仅分离右侧颈动脉后缝合;模型组造模成功后2h后再灌注;低、中、高剂量组分别以10mg/kg、30mg/kg、50mg/kg使用三七总皂苷对造模成功大鼠进行干预,每日一次,持续7天。7天前后按longa评分标准对各组大鼠术神经功能评分标准对各组大鼠进行神经功能缺损评分,TTC染色对梗死体积进行统计,模型组和干预组对脑组织缺血再灌注区域进行取材,假手术组取同一部位大脑皮层组织。2.外泌体的提取鉴定:将各组大鼠脑组织液化匀浆后,使用试剂盒提取各组样本外泌体,使用透射电镜（Transmission Electron Microscope,TEM）观察、纳米粒径分析（Nanoparticle Tracking Analysis,NTA）对外泌体进行检测、验证。3.外泌体miRNA测序:提取外泌体中的总miRNA后进行miRNA文库构建,使用Illumina2100测序平台获取差异表达miRNA的表达谱,对原始下机数据进行质量评估,然后进行有效数据进行参考基因组比对。对已知miRNA进行差异分析,使用mi Randa、targetscan、PITA对miRNA的靶基因进行预测,对预测结果取交集。4.靶基因功能富集分析:使用在线工具g:Profiler进行GO和KEGG富集分析。5.蛋白互作网络功能构建:使用Cytoscape的STRING插件对miRNA的靶基因进行蛋白互作网络（Protein protein interaction network,PPI）构建,对得到的PPI网络使用MCODE算法筛选核心网络,然后使用cyto Hubba插件计算核心网络,得到核心基因。结果1.三七总皂苷对缺血再灌注大鼠神经功能及缺血脑组织的影响。2h~7d对比:假手术组未出现见神经功能缺损,模型组神经缺损功能评分差异无统计学意义,三七总皂苷干预组组内神经缺损评分存在统计学意义。脑组织外观对比:假手术组未见脑组织缺损,模型组存在梗死灶,干预组随三七总皂苷用量的增大梗死面积减小。2.外泌体提取鉴定透射电镜观察,模型组和干预组均可见呈现双层膜茶托样结构的颗粒为外泌体。粒径分析显示:模型组外泌体直径平均直径为102.3nm,峰值在67nm左右,浓度约为1.52×109个/m L;干预组外泌体直径平均值为128.1nm,峰值在103nm左右,外泌体浓度为6.48×108个/m L;干预组外泌体浓度大于模型组,且有统计学意义。3.差异miRNA的鉴定结果通过高通量测序,假手术组对比模型组得到32个差异表达miRNA,其中有29个上调,3个下调;低剂量组对比模型组得到19个差异表达miRNA,其中有18个上调,1个下调;中剂量组对比模型组得到5个差异表达miRNA,其中有2个上调,3个下调。高剂量组对比模型组得到17个差异表达miRNA,其中有5个上调,12个下调。4.差异miRNA靶基因预测结果模型组对比假手术组的差异miRNA预测到5435个靶基因;低剂量组对比模型组的差异miRNA预测到4781个靶基因;中剂量组对比模型组的差异miRNA预测到1480个靶基因;高剂量组对比模型组的差异miRNA预测到5582个靶基因。5.GO和KEGG富集结果（1）模型组假对比假手术组靶基因富集结果:GO富集主要包括蛋白质结合、定位、细胞质;KEGG主要富集在轴突引导通路。（2）低、中、高剂量组对比模型组对比低剂量组靶基因GO和KEGG富集分析:GO富集主要包括蛋白质结合、定位、细胞质;KEGG主要富集在轴突引导通路、肌动蛋白细胞骨架的调节、MAPK信号通路等通路。6.核心基因分析结果（1）假手术组对比模型组的核心基因:Adamts2、Adamts3、Adamts12、Sbspon、Adamts15、Thbs2、Adamts14、Pofut2、Thsd1、Sema5a。（2）低剂量组对比模型组的核心基因:Wnt3a、Wnt8a、Wnt8b、Wnt2、Wnt5a、Wnt7a、Wnt7b、Fzd1、Lrp6、Vamp2。（3）模型组对比中剂量组的核心基因:Wnt10a、Dvl1、Wnt1、Lrp4、Wnt3a、Wnt7b、Wnt4、Dvl3、Dkk3、Frzb。（4）高剂量组对比模型组的核心基因:Wnt3a、Wnt11、Wnt5a、Wnt3、Wnt7b、Wnt5b、Wnt4、Wnt2b、Wnt10a、Wnt8a。结论1.三七总皂苷能改善缺血再灌注大鼠模型的神经功能评分,对缺血性脑卒中具有保护作用。2.三七总皂苷可能通过调控外泌体介导的miRNA表达发挥对缺血性脑卒中的保护作用。