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赭曲霉毒素A (Ochratoxin A, OTA)是由赭曲霉和疣孢青霉等青霉菌产生的次级代谢产物,具有高毒活性,广泛存在于食品和饲料中,严重危害人和动物的健康。本文制备了OTA的单克隆抗体、单链抗体和免疫亲和色谱柱(Immunoaffinity Chromatography, IAC),建立了可以检测OTA残留的酶联免疫检测法(Enzyme linked Immunosorbent Assay, ELISA)、免疫亲和色谱柱-超高效液相色谱串联质谱法(IAC-UPLC-MS/MS)和化学发光酶联免疫检测法(Chemiluminescence Enzyme Immunoassay, CLEIA),为OTA的残留检测提供了快速筛选和定量分析的技术手段。制备出了单克隆抗体4H10,抗体效价为1：1.28×106,亲和力常数Ka=5.31×109mol L-1,重链为IgG1型,轻链为κ型,与OTA、赭曲霉毒素B (Ochratoxin B, OTB)和赭曲霉毒素C(Ochratoxin C,OTC)的交叉反应率分别为100%、26.98%、137.23%,IC50值分别为1.29、4.78、0.94ng mL-1,与黄曲霉毒素(B1、B2、G1、G2、M1、M2,)、伏马菌素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、T-2毒素均无交叉反应。同时以杂交瘤细胞为基因来源,制备出了抗OTA的单链抗体,抗体对OTA的IC50值是8.12ng mL-1,与OTA、OTB和OTC的交叉反应率分别为100%、15.25%、124.34%,与黄曲霉毒素(B1、B2、G、G2、M1、M2)、伏马菌素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、T-2毒素均无交叉反应。以单抗4H10作为抗体材料,建立了玉米、大豆、小麦和猪饲料中OTA的间接竞争酶联免疫检测法(ciELISA),方法线性范围是0.3～3.0μg kg-1,玉米、大豆、小麦的检测限为0.15μgkg-1,猪饲料的检测限为0.60μg kg-1。在1.0～100μg kg-1的添加水平,回收率为80.5～99.1%,变异系数为6.6～13.6%。ciELISA方法的灵敏度、回收率和精密度均符合我国和欧盟相关规定,为玉米、大豆、小麦和猪饲料快速筛选提供了技术手段。以单抗4H10作为抗体材料,制备出了IAC柱。IAC柱动态柱容量为5.59μg mL-1(13.85nmol mL-1gel),绝对柱容量为0.978μg mL-1gel (2.4nmol mg-1Ab). IAC柱重复使用20次后,柱容量(2.25μg mL-1gel)仍能达到初始柱容量的41.3%,回收率和样品净化效果无明显变化,具有良好的重复使用性。以IAC柱作为净化手段建立了谷物(大米、燕麦、大豆、玉米、小麦、荞麦、小米)和猪饲料中OTA的IAC-UPLC-MS/MS定量分析和确证方法,检测限为0.2～0.3μgkg-1,定量限为0.5～1.0pg kg-1,在四个添加水平(0.5～100μg kg-1),回收率为74.1%～104.8%,日内变异系数为4.1～11.3%,日间变异系数为4.7～15.8%,方法准确可靠,为谷物和猪饲料的确证和定量分析提供了技术手段。玉米、大豆、小麦和猪饲料样品中OTA的ciELISA检测方法与IAC-UPLC-MS/MS方法相关系数R2=0.9604,具有良好的相关性。以单抗4H10作为抗体材料,建立了检测牛奶中OTA的ciELISA方法,方法线性范围是0.3～3.0μgL-1,检测限为0.15μg L-1,在0.5～5.0μg L-1的添加水平,回收率为97.1～103.2%,变异系数为7.9～13.8%。同时建立了检测牛奶中OTA的CLEIA检测方法,方法线性范围是0.064～0.67μgL-1,检测限为0.03μgL-1,在0.1～5.0μgL-1的添加水平,回收率为98.3～104.1%,变异系数为11.2～15.4%。本研究建立的牛奶样品的ciELISA和CLEIA检测方法的回收率和精密度均符合我国和欧盟相关规定,为牛奶样品的快速筛选和定量分析提供了技术手段。