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目的:研究脓毒症小鼠肝脏组织氧化应激损伤及观察辣椒素的干预作用。
方法:
1.取SPF级ICR小鼠108只将小鼠随机分为6组(每组n=18):正常对照组(A组),辣椒素(CAP)对照组(B组),辣椒素碱(CAPZ)对照组(C组),脓毒症模型组(D组),CAP干预组(E组),CAPZ干预组(F组)。A组:给小鼠腹腔注射生理盐水;B、C对照组:先分别两组给小鼠皮下注射CAP(1mg/kg)、CAPZ(15mg/kg),30分钟后腹腔注射生理盐水;脓毒症模型D组:给小鼠腹腔注射LPS10mg/kg,构建脓毒症模型;E、F组:先分别给两组小鼠皮下注射CAP(1mg/kg)、CAPZ(15mg/kg),30min后腹腔注射LPS10mg/kg,每组分别于3h、8h、16h麻醉后活杀,活杀后取肝组织,-70℃保存。
2.蛋白免疫印迹法(Western blotting)、ELISA法检测小鼠肝组织细胞核内Nrf2蛋白表达量,RT-PCR法测定各组小鼠肝组织内Nrf2 mRNA表达水平。
3.化学比色法检测小鼠血清中ALT、AST变化及小鼠肝组织MDA、SOD变化。
4.光学显微镜下观察HE染色后肝组织病理。
5.用SPSS19.0统计分析软件进行统计分析,P<0.05的检验标准,差异有统计学意义。
结果:
1.Nrf2表达的变化:与A组相比,D组核内Nrf2蛋白量、mRNA明显升高(P<0.05),与D组相比,E组核内Nrf2蛋白量、mRNA明显升高(P<0.05);F组有下降的趋势。
2.丙二醛(MDA)含量变化:与A组相比,D组细胞内MDA含量明显升高(P<0.05);与D组相比较,E组MDA含量下降,F组MDA含量明显升高(P<0.05)。
3.超氧化物歧化酶(SOD)含量变化:与A组相比,D组SOD活力呈升高趋势(P<0.05);与D组相比,E组SOD含量升高(P<0.05),而F组SOD含量无明显变化。
4.谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)变化:相比A组,D组血清中ALT、AST明显高于A组(P<0.05);与D组相比,E组血清ALT、AST下降(P<0.05);而F组血清ALT、AST增高(P<0.05)。
5.光镜下A组、B组肝细胞未见变性、水肿;D组肝细胞水肿明显,E组较D组、F组肝损伤减轻。
结论:
1.Nrf2氧化应激损伤通路参与脓毒症小鼠肝脏组织的损伤过程。
2.辣椒素可能通过抑制氧化应激通路,减轻脓毒症引起的细胞膜脂质过氧化反应,减轻氧自由基对肝脏的损伤,这可能是辣椒素减轻肝脏损伤的机制之一。