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胀果甘草(Glycyrrhiza inflata Bat.)为豆科(Leguminosae)植物甘草属(Glycyrrhiza)多年生草本植物,是中国药典收录正品之一,胀果甘草的入药部分为植物干燥根和根茎。由于人们对大自然的极度索取,破坏生态环境,受气候影响,土地盐碱化、干旱化日益严重,导致野生药用植物资源极剧减少,而人工种植胀果甘草不仅可以满足市场需要,还可以改良土地,从而修复大自然生态平衡。利用植物组织培养技术,如愈伤组织诱导以及细胞悬浮培养,积累次生代谢产物,如生物碱、黄酮类化合物、皂苷类以及其他活性成分,可应用于医疗和食品等领域,具有广阔前景。主要研究结果如下:
1、以胀果甘草种子为材料,对其千粒重、种子净度、含水量以及吸水率进行测定。胀果甘草种子净度约为98.67%,千粒重为(9.13±0.16)g,含水量约为9.1%。吸水率最高达72.04%,即自然风干种子1.72倍。考察盐碱胁迫、干旱胁迫对种子萌发幼苗生长以及内源激素的变化,双重胁迫下对种子和幼苗的影响。在低浓度NaCl(25~75mmol/L)处理下,可以促进种子萌发和幼苗生长;在Na2CO3(≥30mmol/L)不适宜胀果甘草的生长;轻度干旱下(2%PEG-6000),胀果甘草表现为较强的抗逆性。在轻度盐碱与轻度干旱交叉胁迫下,能促进胀果甘草种子萌发,增加植物抗逆性。最佳组合浓度为A1B1处理组25+15mmol/L的NaCl+Na2CO3和2%的PEG-6000。
2、培育胀果甘草无菌苗,利用响应面法筛选出诱导愈伤最佳激素配比和愈伤组织增殖最佳激素配比,同时对培养基类型、外植体、光照时间等培养条件进行筛选试验,建立愈伤组织培养体系。胀果甘草愈伤组织诱导最佳生长条件:以下胚轴为外植体,B5+2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)0.62mg/L+6-苄氨基嘌呤(6-BA)1.35mg/L+激动素(KT)0.33mg/L,12h/d光照;胀果甘草愈伤组织继代培养最佳生长条件:B5+2,4-D0.77mg/L+6-BA2.7mg/L+KT0.65mg/L,12h/d光照,继代周期为20d。
3、利用愈伤组织进行细胞悬浮培养,筛选出最佳培养条件,建立胀果甘草细胞悬浮体系;添加不同诱导子,研究其对悬浮细胞生物量的影响;对细胞悬浮物中活性成分含量进行测定。最佳悬浮培养条件:MS液体培养基+萘乙酸(NAA)1.0mg/L+KT0.5mg/L,pH=6,转速120r/min,黑暗培养,继代周期为24d。添加诱导子壳聚糖(6mmol/L)可以增加胀果甘草悬浮细胞增长量。
1、以胀果甘草种子为材料,对其千粒重、种子净度、含水量以及吸水率进行测定。胀果甘草种子净度约为98.67%,千粒重为(9.13±0.16)g,含水量约为9.1%。吸水率最高达72.04%,即自然风干种子1.72倍。考察盐碱胁迫、干旱胁迫对种子萌发幼苗生长以及内源激素的变化,双重胁迫下对种子和幼苗的影响。在低浓度NaCl(25~75mmol/L)处理下,可以促进种子萌发和幼苗生长;在Na2CO3(≥30mmol/L)不适宜胀果甘草的生长;轻度干旱下(2%PEG-6000),胀果甘草表现为较强的抗逆性。在轻度盐碱与轻度干旱交叉胁迫下,能促进胀果甘草种子萌发,增加植物抗逆性。最佳组合浓度为A1B1处理组25+15mmol/L的NaCl+Na2CO3和2%的PEG-6000。
2、培育胀果甘草无菌苗,利用响应面法筛选出诱导愈伤最佳激素配比和愈伤组织增殖最佳激素配比,同时对培养基类型、外植体、光照时间等培养条件进行筛选试验,建立愈伤组织培养体系。胀果甘草愈伤组织诱导最佳生长条件:以下胚轴为外植体,B5+2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)0.62mg/L+6-苄氨基嘌呤(6-BA)1.35mg/L+激动素(KT)0.33mg/L,12h/d光照;胀果甘草愈伤组织继代培养最佳生长条件:B5+2,4-D0.77mg/L+6-BA2.7mg/L+KT0.65mg/L,12h/d光照,继代周期为20d。
3、利用愈伤组织进行细胞悬浮培养,筛选出最佳培养条件,建立胀果甘草细胞悬浮体系;添加不同诱导子,研究其对悬浮细胞生物量的影响;对细胞悬浮物中活性成分含量进行测定。最佳悬浮培养条件:MS液体培养基+萘乙酸(NAA)1.0mg/L+KT0.5mg/L,pH=6,转速120r/min,黑暗培养,继代周期为24d。添加诱导子壳聚糖(6mmol/L)可以增加胀果甘草悬浮细胞增长量。