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[背景与目的]
细胞衰老的表型包括细胞核形态异常，细胞的增殖能力和DNA分子损伤修复能力减退等。核纤层和核纤层蛋白对于细胞核正常核形态的维持是至关重要的。核纤层蛋白结合蛋白的表达异常会使细胞增殖能力变慢和DNA损伤修复发生缺陷，与细胞衰老密切相关。在前期研究中，本课题组已经证明Fam96B(Family with sequence similarity96, member B)蛋白又称为MIP18，它与A型核纤层蛋白前体(prelamin A)相互作用。也有研究报道，MMS19、XPD等DNA损伤修复蛋白与Fam96B在细胞质中相互作用，参与DNA损伤修复。本文拟进一步探讨Fam96B与细胞早老和复制性衰老的关系;Fam96B对维持细胞核形态和DNA损伤中的影响，以期揭示Fam96B在细胞衰老过程中的潜在分子机制。
[方法]
利用Western blotting技术检测野生型(WT)和Zmpste24-/-的MEFs、年轻和衰老的MEFs、健康个体和HGPS早老症患者成纤维细胞中Fam96B的表达变化;通过构建稳定沉默Fam96B表达的HEK293T细胞株为研究模型，采用EdU掺入法检测细胞增殖能力，流式细胞仪检测细胞周期，DAPI染色观察细胞核形态;利用DN损伤诱导剂羟基脲（HU）处理HEK293T稳定细胞株，使细胞发生DNA损伤，然后利用Western blotting技术检测正常和稳定沉默Fam96B表达的HEK293T细胞γ-H2A.X的表达;利用Western blotting技术检测细胞内下调Fam96B的表达后，DN损伤修复相关蛋白MMS19和XPD的表达变化;利用siRNA沉默MEFs细胞中Fam96B的表达，Western blotting技术检测细胞内Fam96B和γ-H2A.X的表达，β-半乳糖苷酶染色检测MEFs细胞衰老。
[结果]
1.Fam96B在WT和Zmpste24-/-MEFs中的蛋白表达无明显差异。
2.与年轻MEFs细胞(P1)相比，Fam96B在复制性衰老的MEFs(P9)中的蛋白表达显著下调。
3.与健康个体(F2-S)相比，Fam96B在HGPS早老症患者成纤维细胞中的蛋白表达下调。
4.稳定沉默Fam96B的表达对HEK293T细胞的细胞周期无显著影响。
5.与对照组相比，稳定沉默Fam96B的表达后，HEK293T细胞的增殖能力减弱，差异有统计学意义(P＜0.05)，核形态异常率也明显增加(5.3％ vs16.4％)。
6.与对照组HEK293T细胞相比，HU处理细胞后，DN损伤检测蛋白γ-H2AX在稳定沉默Fam96B的HEK293T细胞株中表达上调。
7.HEK293T细胞内Fam96B的表达下调后，DNA损伤修复相关蛋白MMS19和XPD的表达均下调。
8.沉默Fam96B的表达可促进MEFs细胞DNA损伤和加速细胞衰老。
[结论]
在Zmpste24缺失的MEFs细胞模型中，prelamin A的堆积可能不影响Fam96B的表达。Fam96B的蛋白水平下调可能与Progerin堆积引起的细胞早老相关。细胞中稳定沉默Fam96B的表达，可能使细胞的DNA损伤加剧，以及MMS19和XPD蛋白表达下调导致DNA损伤修复能力减弱。沉默Fam96B的表达可促进MEFs细胞DNA损伤和加速细胞衰老。以上结果表明细胞早老或DNA损伤引起的细胞衰老可能部分通过Fam96B途径来实现。