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[目的]甲型病毒性肝炎(甲肝)是由甲型肝炎病毒(HepatitisAvirus,HAV)感染引起的急性肠道传染性疾病,在发展中国家是重要的公共卫生问题之一。随着社会经济发展和卫生条件改善,甲型肝炎发病率已明显下降,但目前全球每年仍有150万例甲型肝炎报道。WHO(WorldHealthOrganization,世界卫生组织)关于甲型病毒性肝炎疫苗的意见书中提出推荐中等收入国家开展甲肝疫苗大规模接种。2007年,我国将甲肝疫苗纳入了儿童国家免疫扩大规划(National Immunization Program,NIP)。中国医学科学院医学生物学研究所生产的冻干甲型肝炎减毒活疫苗——维赛瑞吉和甲型肝炎灭活疫苗——维赛瑞安,是我国自主研制,具有自主知识产权的用于预防重大传染病甲肝的创新性疫苗品种,于NIP中大量应用。本次临床试验旨在基于前期的研究基础,在多个省市,开展多中心的大规模甲型肝炎减毒活疫苗和甲型肝炎灭活疫苗IV期临床研究,研究在大量目标人群和特殊人群中使用上述两种甲肝疫苗免疫的安全性、免疫原性、免疫持久性,对其有效性、安全性和质量进行监测。本论文选取其中一个现场江苏省响水县现场不同时间点血清样本甲肝抗体(anti-HAV)滴度的定量检测结果,针对阳转率和几何平均滴度进行统计分析,论述对冻干甲型肝炎减毒活疫苗和甲型肝炎灭活疫苗的免疫原性以及免疫持久性的综合评价。为确保结果稳定可靠,实验室还按照国际标准化组织 ISO 15189(International Standardization Organization 15189)医学实验室-质量和能力中关于“实验室应设计并实施测量系统校准和真实性验证的计划”的要求,参照部分EP文件,对检测方法和试剂的精密度、准确度、可报告范围(线性评价)设计方案进行了验证。[方法]按照随机、双盲、平行对照的试验设计,在受试者知情同意前提下,选择近3年未发生过甲型肝炎炎流行亦未接种过甲型肝炎疫苗的儿童及成人作为受试对象,两种试验疫苗总接种人数为9000人,采血对象由接种对象中随机每组抽取900人,两种试验疫苗总采血人数为1800人。采用罗氏公司Cobase411全自动电化学发光免疫分析仪以及相关配套试剂进行anti-HAV的定量检测,参照部分EP文件,对检测方法和试剂的精密度、准确度、可报告范围(线性评价)设计方案进行验证,对结果进行统计学分析,计算两种疫苗接种后甲肝抗体的阳转率(seroconversion rate,SR)以及几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)的分布并进行两疫苗间比较,基于此观察疫苗的保护效果和免疫持久性。[结果]检测方法和试剂的精密度、准确度、可报告范围(线性评价)验证结果说明低值质控品A-HAV1和高值质控品A-HAV2的批均值与总体均值皆在靶值±3SD之间,符合美国CLIA’ 88标准,说明甲肝抗体检测精密度可接受;甲肝抗体检测结果偏倚(Bias)为3.77%,与我国行业标准的偏倚(Bias)指标(4.3%)进行比较,偏倚小于行业标准指标,说明正确度验证结果可接受;多项式回归结果显示,在3.66-83.17IU/L(仪器可报告范围:3.0-60.0 IU/L)范围内,三次多项式拟合数据点比线性好,但线性拟合与三次多项式拟合之间的差值小于预先设定的该方法的允许偏差4.02 IU/L,说明线性验证结果可接受。提示该检测可为甲肝疫苗的四期临床研究提供稳定可靠的甲肝抗体定量检测数据。基于此统计的两疫苗接种组的阳转率以及几何平均滴度和分布表明不论是甲肝减毒疫苗还是甲肝灭活疫苗都有卓越的免疫原性和免疫持久性。针对免疫原性,甲肝减毒疫苗在接种全程后 28 天 GMT 达到了 979.67IU/L(95%CI:842.59-1139.04 IU/L),SR 达到98.11%(95%CI:95.65-99.38%);而甲肝灭活疫苗在接种第一针后28天GMT达到 894.71IU/L(95%Cl:793.08.56-1009.36 IU/L),SR 达到 99.64%(95%CI:98.01-99.99%),接种甲肝灭活疫苗第二针即全程后28天GMT达到3697.67IU/L(95%CI:3373.31-4053.21 IU/L),SR 达到 100.00%(95%CI:99.10-100.00%)。显示能够刺激机体产生较高滴度的anti-HAV以及保护效果,与国际国内其他甲肝疫苗一致具有优秀的免疫原性。且与目前的其他研究结果一致,接种甲肝灭活疫苗全程后的anti-HAV滴度高于仅接种1针,说明对于甲肝灭活疫苗,完整的2剂接种方案的效果优于仅接种1剂。针对免疫持久性,在3年的观察期间,两种疫苗的GMT和SRs在各个检测时点都维持较高水平,显示出很好的免疫持久性。对甲肝减毒疫苗,接种全程后1年,GMT为1538.08IU/L(95%CI:1300.71-1818.77 IU/L),SR达到 99.63%(95%CI:97.97-99.99%);接种后 2年,GMT 为 5472.88IU/L(95%CI:4638.01-6458.02 IU/L),SR 为 97.07%(95%CI:94.31-98.73%),略有下降;接种后 3 年,GMT 为 5252.33IU/L(95%CI:4478.40-6160.01IU/L),SR 回升至99.62%(95%CI:97.92-99.99%)。对甲肝灭活疫苗,接种全程后1年,GMT为4311.00IU/L(95%CI:3635.52-5111.97 IU/L),SR 达到 100.00%(95%CI:98.82-100.00%);接种后 2 年,GMT 为 4283.25IU/L(95%CI:3725.27-4924.82 IU/L),SR 为 96.73%(95%CI:94.07-98.42%),略有下降;接种后 3 年,GMT 为7707.92IU/L(95%CI:6944.29-8555.52IU/L),SR 回升至 100.00%(95%CI:98.75-100.00%)。观察期间两种疫苗都没有检测到GMT下降的趋势,使得难以通过统计拟合的方式估算免疫持久性的最长延续时间。而两种疫苗的SRs都出现了接种全程后第二年从高值下降而在第3年又回升的情况,其中甲肝减毒疫苗组的下降与回升趋势间的差异没有统计学意义。对甲肝减毒疫苗组和甲肝灭活疫苗组两疫苗组之间免疫原性和免疫持久性进行比较,发现当只接种一剂疫苗的时候,接种后28天两疫苗组的GMT并没有统计学意义上的差异,而当把甲肝减毒疫苗接种后与接种全程灭活疫苗后进行比较时,发现不论是接种后28天,1年,2年,或是3年都是甲肝灭活疫苗组的GMT更高。而针对阳转率的统计比较发现,除了接种甲肝减毒疫苗后28天和接种甲肝灭活疫苗全程后28之间的差异有统计学意义,接种全程灭活疫苗的更高以外,其他时间点的比较中,两疫苗的阳转率都是没有统计学意义上的差异的。[结论]总之,论文在严格的IV期临床试验设计中,在对罗氏公司Cobase411全自动电化学发光免疫分析仪以及相关配套试剂罗氏甲型肝炎病毒抗体(Anti-HAV)测定试剂盒(电化学发光法)检测的精密度、准确度、可报告范围(线性评价)验证基础上,对灭活疫苗组和甲肝减毒疫苗组进行分析和比较,结果证明两种疫苗皆有良好的免疫原性和免疫持续性,支持对疫苗的规划应用和进一步推广使用。