背景与目的： CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)是一群具有免疫负调节功能的T细胞亚群，在肿瘤的免疫逃逸中扮演重要角色。Foxp3为其发育和发挥功能所必需的转录因子，也是检测Treg特异性的标志之一。有研究表明Treg在多种肿瘤患者外周血和肿瘤组织中升高，是影响患者预后的一个不利因素。但是Treg的动态变化与肝内胆管癌(胆管细胞性肝癌)进展的关系尚未见报道。本研究采用硫代乙酰胺诱导大鼠肝内胆管癌，流式细胞仪检测诱癌过程中大鼠外周血、脾脏、肿瘤组织以及肝脏组织中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的水平，免疫组织化学法检测肿瘤组织中EGFR、HER—2的表达，以探讨Treg的变化规律及其在肝内胆管癌发生发展过程中的作用，并分析EGFR、HER—2表达与肿瘤组织内调节性T细胞浸润的关系，其结果可望为临床设计、实施以调节性T细胞为靶标的肿瘤免疫治疗提供理论依据。 方法： 80只大鼠，随机分成正常对照组(40只)和硫代乙酰胺诱癌组(40只)。实验组每日饮用蒸馏水配制的硫代乙酰胺溶液，浓度为300mg/L，连续饮用24周。对照组自由饮用蒸馏水，所有动物自由饮食。从诱癌第10周起至24周，每隔2周每组各处死5只大鼠，流式细胞仪检测外周血、脾脏CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数量，免疫组织化学染色检测肿瘤组织及肝脏组织内Foxp3蛋白表达，分析外周血、脾脏、肿瘤组织中调节性T细胞在肝内胆管癌发生发展过程中的变化规律；检测组织中肿瘤相关抗原EGFR、HER—2的表达并分析其与调节性T细胞动态变化的相互关系。 结果： 1.硫代乙酰胺诱导大鼠肝内胆管癌模型：在诱癌的过程中，大鼠肝脏镜下呈阶段性变化，依次发生以胆管腺体增生(12-14周)、重度不典型增生(16周)、浸润性癌(18-24周)为主的病理变化。 2.大鼠外周血、脾脏中Treg在诱癌模型中的动态变化： 实验组大鼠外周血Treg在诱癌第10周、12周与对照组Treg比例相当。自诱癌第14周起，大鼠外周血Treg占CD4+T细胞百分比高于对照组((4.25±0.64) vs(3.76±0.60)，P＜0.001)，之后逐渐升高，到18周时到高峰，为(6.18±0.64)，与14周比较，差异有统计学意义(P=0.046)。此后开始下降，第24周时为(3.70±0.46)，较18周明显降低(P=0.007)，但仍高于对照组(P＝0.040)。 实验组大鼠脾脏Treg在诱癌10周至16周与对照组Treg比例相当。自18周起，脾脏Treg高于对照组((5.22±1.20) vs(3.30±0.24)，P=0.016)，第20周时达到高峰(8.54±0.36)，第22周、24周时均低于18周(P值分别为0.033，0.006)。 3.大鼠肝脏组织Treg在诱癌过程中的动态变化：在诱癌第12周至16周，大鼠肝脏组织以胆管增生、非典型增生为主，增生组织以及周围肝组织Treg浸润水平与对照组肝组织之间差异无统计学意义(P值均大于0.05)。 在诱癌第18周时，大鼠肿瘤组织Treg为(2.30±0.86)/高倍视野(以下单位相同)，高于对照组(0.40±0.55)，差异有统计学意义(P＝0.045)。随着肿瘤的进展，肿瘤组织中Treg水平逐步升高，到第24周时达到最高(5.67±2.11)。癌旁肝组织Treg也随肿瘤进展而增多。 4.大鼠肝内胆管癌Treg与EGFR、HER—2的关系： EGFR在大鼠肝内胆管癌癌细胞胞膜和胞质中表达，阳性率为77.5％(31/40)。在16周以前，EGFR在增生胆管组织可见表达，阳性率为65％(13/20)，18周以后，主要表达在肿瘤组织中，阳性率为90％(18/20)，EGFR阳性率未随肿瘤进展而升高(P=0.064)。 Spearman相关分析未发现Treg与EGFR表达的关系(P=0.358)。EGFR高表达组(3+)肿瘤组织中Treg为(4.13±2.75)，低表达组(2+及以下)肿瘤组织中Treg为(3.16±2.34)，两组之间差异无统计学意义(P>0.05)。癌旁EGFR高表达组Treg为(1.76±1.47)，EGFR低表达组为(1.28±0.41)，差异无统计学意义(P>0.05)。 HER—2在大鼠肿瘤细胞胞膜和细胞质中表达。实验组16周以前可见增生腺体以及非典型病变组织可见HER—2表达，阳性率为25％，18周以后与肿瘤组织中表达，HER—2阳性率为65％，HER—2表达阳性率随肿瘤进展而升高(P=0.011)。 HER—2表达阳性组Treg为(3.97±2.55)，高于HER—2表达阴性组(1.82±1.28)，两组之间差异有统计学意义(P=0.001)。癌旁HER—2阳性组Treg为(2.00±1.40)，而HER—2阴性的Treg是(0.88±0.46)，两组相比有统计学意义(P=0.001)，HER—2的表达与肿瘤组织Treg正相关。 结论： 本研究结果提示：在大鼠肝内胆管癌发生发展过程中，外周血、脾脏Treg在癌前病变以及肿瘤早期升高，与肿瘤的发生有关，可能是监测早期肿瘤的一个免疫学指标；在肿瘤晚期，外周血、脾脏Treg不能反应机体内免疫抑制的真正水平。肿瘤组织Treg水平与肿瘤进展相关，能反映机体内免疫抑制程度；可能是临床预测肝内胆管癌预后和治疗干预的免疫学指标。肝内胆管癌HER—2的表达与Treg正相关，是Treg在肿瘤组织中富集的可能机制。胆