【摘 要】
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目的:通过检测大鼠胃黏膜上皮细胞RGM-1的存活率,ROS、IL-6、TNF-α以及自噬相关蛋白LC3、p62的表达水平,探讨灭幽汤含药血清对幽门螺杆菌（Hp）感染大鼠胃黏膜上皮细胞自噬的影响。方法:使用健康SD大鼠30只制备灭幽汤含药血清及空白血清,后使用CCK-8法测定血清最大无毒浓度。将实验分为对照组、Hp刺激组、单纯灭幽汤组、Hp刺激+灭幽汤组、3-MA组、3-MA+Hp刺激组、3-MA+
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目的:通过检测大鼠胃黏膜上皮细胞RGM-1的存活率,ROS、IL-6、TNF-α以及自噬相关蛋白LC3、p62的表达水平,探讨灭幽汤含药血清对幽门螺杆菌（Hp）感染大鼠胃黏膜上皮细胞自噬的影响。方法:使用健康SD大鼠30只制备灭幽汤含药血清及空白血清,后使用CCK-8法测定血清最大无毒浓度。将实验分为对照组、Hp刺激组、单纯灭幽汤组、Hp刺激+灭幽汤组、3-MA组、3-MA+Hp刺激组、3-MA+Hp刺激+灭幽汤组共7组,将RGM-1细胞培养于96孔板内,24小时后在单纯灭幽汤组、Hp刺激+灭幽汤组、3-MA+Hp刺激+灭幽汤组中加入含10%灭幽汤含药血清的培养基,在3-MA组、3-MA+Hp刺激组中加入含3-MA（5mmol/L）的培养基,同时在Hp刺激组、Hp刺激+灭幽汤、3-MA+Hp刺激+灭幽汤组中加入Hp刺激,共培养24小时后,用CCK-8法检测细胞存活率、DCFH-DA流式细胞仪测定细胞内ROS表达水平、ELISA法检测IL-6、TNF-α的表达水平,Western-blot法检测自噬相关蛋白LC3、p62的表达水平。结果:当含药血清浓度为10%时细胞存活率＞95%,且存活率最高。与对照组相比,Hp刺激组的细胞存活率显著降低,IL-6及TNF-α、ROS表达水平显著升高（P＜0.01）;3-MA组的LC3-II/LC3-I显著降低（P＜0.01）,p62上调,ROS表达水平升高（P＜0.05）。与Hp刺激组相比,Hp刺激+灭幽汤组的细胞存活率和IL-6、TNF-α表达水平显著降低,LC3-II/LC3-I显著升高,p62显著下调（P＜0.01）;3-MA+Hp刺激组的ROS表达水平显著升高,p62显著上调,LC3-II/LC3-I显著降低（P＜0.01）。与Hp刺激+灭幽汤组相比,3-MA+Hp刺激+灭幽汤组的细胞存活率、TNF-α水平显著升高,p62表达水平显著上调（P＜0.01）,ROS表达水平及LC3-II/LC3-I显著降低（P＜0.01）。与3-MA+Hp刺激相比,3-MA+Hp刺激+灭幽汤组,细胞存活率、LC3-II/LC3-I显著升高,ROS、IL-6、TNF-α表达水平显著降低（P＜0.01）,p62表达降低（P＜0.05）。结论:1.灭幽汤含药血清最大无毒浓度为10%。2.Hp的刺激可导致RGM-1细胞中的炎症因子IL-6、TNF-α表达水平升高,造成炎症反应,从而损伤细胞。3.3-MA可抑制RGM-1细胞自噬,降低LC3-II/LC3-I,上调p62的表达,升高ROS表达水平。4.灭幽汤含药血清可使RGM-1细胞的LC3-II/LC3-I升高,下调p62的表达,激活自噬,并能部分拮抗3-MA的自噬抑制作用,降低ROS、IL-6、TNF-α等炎症因子的表达水平,从而减轻炎症反应,保护被Hp感染的RGM-1细胞。
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