人体内只有一种蛋白质类激素能够帮助调节人血糖——胰岛素,它对人体健康起到了举足轻重的作用。本研究将赖脯胰岛素（Insulin Lispro）作为主要研究对象,它是第三代的胰岛素——胰岛素类似物的代表性研究成果,与人胰岛素相比,其经过皮下注射后吸收较快,降血糖作用起效更快,血药浓度峰值更高,可更好地控制糖尿病人餐后引起的高血糖。迄今为止,国内外对胰岛素及其类似物的定量分析研究广泛,其中主要以液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）的手段来考察居多,但是分析方法仍然存在诸多问题,例如色谱分离差,回收率低下等,因此迫切需要建立一种经济高效并适用于实验室日常分析的方法。第一部分:本文以赖脯胰岛素为研究对象,通过建立了超高液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）进行分析。使用正模式的电喷雾离子源,并采用多反应检测模式,通过质谱50～1500 Da范围内的全扫描确定母离子,然后采用不同能量碰撞诱导解离获得最高响应的子离子来确定所需离子对,最终采用离子对为赖脯胰岛素m/z（1162.5→217.2）和牛胰岛素m/z（1157.5→136.0）。使用牛胰岛素作为内标,经样品前处理条件优化后发现非沉淀回收率最高,并通过在配制溶剂中加入0.1%的空白大鼠血浆解决了胰岛素易产生的静电吸附问题。血浆样品经过固相萃取后,进入色谱系统分离,色谱柱为沃特世公司生产的UPLC Peptide CSH C18 Column（2.1 mm×50 mm,1.7μm）,每个样品的总运行时间为5 min。第二部分:参考FDA和中国药典进行方法学验证,结果表明,设置0.1～100 ng·m L-1的标准曲线范围符合预期;所开发方法的日内、日间准确度和精密度也在±20%的接受范围之内,回收率范围处于63.1%～68.1%,在不同条件下稳定性结果也符合预期标准,可作为实验室日常检测的方法。所开发方法与以往文献报道方法相比,色谱分离优秀,回收率翻倍。第三部分:以大鼠作为动物实验对象,将开发的分析赖脯胰岛素UPLC-MS/MS分析方法应用于其单剂量皮下注射药物代谢动力学研究。采用交叉取血法对18只SD大鼠进行皮下注射90μg·kg-1的赖脯胰岛素,经过药代参数计算,药物的达峰浓度12.46 ng·m L-1,半衰期为36.49 min,平均驻留时间为52.07 min,达峰时间为15 min,药时曲线下面积776.47 min·ng·m L-1,所有药代数据结果均与文献报道相符,为赖脯胰岛素在哺乳动物体内的药代动力学结果提供参考。