中间锦鸡儿4个R2R3-MYB基因的克隆表达分析

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:ruiye
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干旱、盐碱、高温、低温和氧化等非生物胁迫是世界范围内作物减产的主要原因。应用转录因子改善植物抗逆性已经成为当今的研究热点。MYB类转录因子是植物中最大的转录因子家族之一,而R2R3-MYB类是植物MYB基因编码蛋白中最丰富的类型。R2R3-MYB在初生与次生代谢、生长发育及对生物与非生物胁迫的应答等各个方面具有重要功能。中间锦鸡儿(Csragana intermedia)作为重要的保水、防风、固沙类灌木,在高寒沙地被作为主要造林灌木树种之一。本研究以中间锦鸡儿为实验材料克隆到4个R2R3-MYB类转录因子,分别命名为CiMYB102、CiMYB31、CiMYB60和CiMYB185,并对其表达模式及启动子顺式作用元件进行了分析。主要结果如下:1.从干旱转录组数据库中筛选到4个R2R3-MYB并对其cDNA和gDNA进行了克隆。CiMYB102、CiMYB31、CiMY60与 CiMYB185 的 ORF 长度分别为 1107 bp、969 bp、1038 bp与906 bp,分别编码369、323、346和302个氨基酸。CiMYB102 CiMYB31、CiMYYB60与CiMYB185基因gDNA序列长度分别为1396 bp、1724 bp、1485 bp和1592 bp,其中CiMYB102、CiYB31和CiMYB60均包含2个内含子和3个外显子,而CiM7B185包含1个内含子和2个外显子。2.利用实时荧光定量PCR技术分析了 4个R2R3-MYB基因不同胁迫下的表达模式。发现CiMYB31和CiMYB185受到低温的诱导,CiMYB102受脱水、NaCl、ABA和千旱的诱导,在脱水、NaCl、UV-B处理下CiMYB60的表达量均降低。表明四个R2R3-MYB可能在中间锦鸡儿对非生物肋迫的响应过程中起作用。3.利用染色体步移技术克隆了 4个基因的启动子序列。CiMYB102、CiMYB31、CiMYB60与CiMYB185的ATG上游序列长度分别为1359 bp、902 bp、1848 bp与908 bp,分析显示启动子序列中包含一些与光反应、组织特异性表达、激素和非生物胁迫相关的响应元件。4.CiMYB102、CiMYTB60及CiMYB31在不同组织部位表达存在差异,在根中的表达量均为最低。CiMYB102在茎中表达量最高,CiMYB31在叶中表达量最高,CiMYB60在叶与茎中表达量均相对较高。5.构建 了过表达载体p35s::CiMYB102-GFP、p35s::CiMYB31-GFP和p35s::CiMYB60-GFP,转化野生型拟南芥并筛选得到纯合体株系。
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