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目的探讨微小核糖核酸-145-5p(micro Ribonucleic Acid-145-5p,mi R-145-5p)靶向双特异性磷酸酶6(dual specificity phosphatase 6,DUSP6)对子宫内膜癌增殖、迁移、侵袭以及凋亡能力的影响,为研究mi R-145-5p靶向防治子宫内膜癌奠定一定的实验基础。方法1、常规培养子宫内膜癌Ishikawa细胞株,采用脂质体Lipofectamine 2000法将模拟物(mimic)、抑制物(inhibitor)及阴性对照物转染Ishikawa细胞,干扰mi R-145-5p表达。实验分为5组:未转染组、mimic阴性对照组、mimic组、inhibitor阴性对照组、inhibitor组,实时荧光定量PCR方法检测转染后各组mi R-145-5p表达水平。2、MTT实验检测mi R-145-5p对Ishikawa细胞增殖能力的影响。3、划痕实验检测mi R-145-5p对Ishikawa细胞迁移能力的影响。4、Transwell实验检测mi R-145-5p对Ishikawa细胞侵袭能力的影响。5、流式细胞术实验检测mi R-145-5p对Ishikawa细胞凋亡的影响。6、通过mi RTar Base、Target Scan、Target Miner及mi RDB四个生物信息学在线网站预测筛选mi R-145-5p的候选靶基因。7、q RT-PCR及Western Blot方法检测上调或下调mi R-145-5p对子宫内膜癌Ishikawa细胞中DUSP6 m RNA及蛋白表达的影响,初步验证mi R-145-5p的潜在靶点,Western Blot方法检测DUSP6下游磷酸化的细胞外信号调节激酶1/2(p ERK1/2)表达水平。结果1、q RT-PCR实验结果表明,mimic组Ishikawa细胞的mi R-145-5p表达水平明显高于未转染组和mimic阴性对照组(P<0.05),inhibitor组Ishikawa细胞的mi R-145-5p表达水平明显低于未转染组和inhibitor阴性对照组(P<0.05),结果显示本研究成功地上调和下调了子宫内膜癌Ishikawa细胞株中mi R-145-5p的表达。2、MTT实验结果证实,mimic组细胞增殖能力较未转染组和mimic阴性对照组降低,过表达mi R-145-5p抑制Ishikawa细胞增殖(P<0.05);inhibitor组细胞增殖能力较未转染组和inhibitor阴性对照组增高,低表达mi R-145-5p促进Ishikawa细胞增殖(P<0.05)。3、划痕实验表明,mimic组细胞划痕面积在24h后显著大于未转染组和mimic阴性对照组,过表达mi R-145-5p抑制Ishikawa细胞迁移(P<0.05);inhibitor组细胞划痕面积在24h后显著小于未转染组和inhibitor阴性对照组,低表达mi R-145-5p促进Ishikawa细胞迁移(P<0.05)。4、Transwell实验表明,mimic组细胞侵袭数目显著小于未转染组和mimic阴性对照组,过表达mi R-145-5p能够抑制细胞侵袭(P<0.05);inhibitor组细胞侵袭数目显著大于未转染组和inhibitor阴性对照组,低表达mi R-145-5p能够促进细胞侵袭(P<0.05)。5、流式细胞术实验表明,mimic组细胞凋亡率显著高于未转染组和mimic阴性对照组,过表达mi R-145-5p能够促进子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡(P<0.05);inhibitor组细胞凋亡率显著低于未转染组和inhibitor阴性对照组,低表达mi R-145-5p能够抑制Ishikawa细胞凋亡(P<0.05)。6、生物信息学在线软件提示DUSP6是mi R-145-5p靶基因之一。7、q RT-PCR及Western Blot实验显示,mimic组DUSP6 m RNA及蛋白表达显著低于未转染组和mimic阴性对照组,过表达mi R-145-5p下调Ishikawa细胞中DUSP6 m RNA及蛋白表达(P<0.05);inhibitor组DUSP6 m RNA及蛋白表达显著高于未转染组和inhibitor阴性对照组,低表达mi R-145-5p促进Ishikawa细胞中DUSP6 m RNA及蛋白表达(P<0.05);Western Blot实验显示DUSP6蛋白表达与p ERK1/2蛋白表达呈现相反趋势(P<0.05)。结论mi R-145-5p在子宫内膜癌Ishikawa细胞中发挥抑癌作用,过表达mi R-145-5p能够抑制Ishikawa细胞增殖、迁移及侵袭,并促进Ishikawa细胞凋亡;相反低表达mi R-145-5p能够促进Ishikawa细胞增殖、迁移及侵袭,并抑制Ishikawa细胞凋亡。mi R-145-5p通过靶向调节DUSP6并间接调节p ERK1/2蛋白的表达,从而影响子宫内膜癌的发生与发展,本研究在子宫内膜癌的增殖、迁移、侵袭、凋亡及发病机制研究领域提供了新的思路,mi R-145-5p可能成为治疗子宫内膜癌的潜在靶点。