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目的肺癌是当今世界上严重威胁人类健康和生命的恶性肿瘤,在癌症死亡中肺癌是男性和女性死亡的主要原因。现已证实肺癌细胞及肺癌组织HnRNPB1表达明显增高。且HnRNPB1可与端粒重复序列结合,并参与端粒酶介导的端粒长度的维持,提示HnRNPB1可能通过调节端粒酶活性,维持端粒长度,使细胞持续分裂而永生化。hTERT是端粒酶的主要活性成分,其表达与肺癌端粒酶活性密切相关。本实验通过观察肺癌细胞A549HnRNPB1基因沉默前后hTERT活性的变化,及其与肺癌细胞A549凋亡的关系,为探讨HnRNPB1在肺癌发生发展中的分子机制提供实验依据。方法采用通过RNA干扰技术抑制HnRNPB1基因表达的肺癌细胞株A549为研究对象,并根据干扰的HnRNPB1基因不同的靶序列,将实验组分为四组(A、B、C、D组)。对照组为转染空质粒的A549细胞(E组)和未转染任何质粒的A549细胞(F组)。用流式细胞计数观察HnRNPB1SiRNA对肺癌细胞A549凋亡的影响;采用RT-PCR和免疫细胞化学的方法分别检测肺癌细胞A549 HnRNPB1基因沉默前后hTERT的mRNA和蛋白表达水平。结果(1)HnRNPB1对肺癌细胞A549周期和凋亡的影响:HnRNPB1SiRNA具有抑制肺癌细胞增殖、促进凋亡的作用,实验组凋亡率较对照组明显增加,分别为A组(19.2±1.25)%、B组(23.4±3.12)%、C组(24.0±2.28)%、D组(33.5+2.49)%,而对照组凋亡率仅(8.7±1.86)%、(9.1±2.21)%。且实验组S期细胞分别为A组(27.0±2.97)%、B组(25.4±3.65)%、C组(24.2±4.12)%、D组(19.6±3.56)%,较对照组明显减少;(2)HnRNPB1对肺癌细胞A549 HnRNPB1 mRNA的影响:RT-RCR结果显示:HnRNPB1 SiRNA能够降低肺癌细胞A549 HnRNPB mRNA的表达,在实验组HnRNPB mRNA的抑制率分别为:77.69%、74.37%、75.65%和83.04%;(3)HnRNPB1对肺癌细胞A549 hTERT mRNA表达的影响:RT-RCR结果显示:HnRNPB1 SiRNA能够降低肺癌细胞A549 hTERTmRNA的表达,在实验组hTERT mRNA的抑制率分别为88.67%、90.67%、91.33%、86.67%,而空质粒组hTERT mRNA表达未受抑制;(4)HnRNPB1对肺癌细胞A549 hTERT蛋白表达水平的影响:免疫细胞化学结果显示,各实验组hTERT蛋白阳性表达率较对照组明显降低,有统计学意义,提示HnRNPB1 SiRNA能够降低hTERT蛋白的表达;(5)相关性分析提示HnRNP B1 mRNA的表达和hTERT mRNA的表达成明显的正相关,而HnRNP B1 mRNA和hTERT mRNA的表达与细胞凋亡率成负相关。结论(1)HnRNPB1 SiRNA能特异性抑制肺癌A549细胞HnRNP B1基因表达;(2)HnRNPB1 SiRNA能够促进肺癌细胞A549凋亡,抑制其增殖:(3)HnRNPB1 SiRNA能够抑制A549细胞hTERT mRNA及蛋白水平的表达;(4)HnRNP B1可通过调节hTERT活性参与肺癌细胞的增殖和凋亡的调节。