HnRNPB1基因特异性SiRNA对肺癌细胞A549端粒酶逆转录酶影响的研究

来源 :四川大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shijun21
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的肺癌是当今世界上严重威胁人类健康和生命的恶性肿瘤,在癌症死亡中肺癌是男性和女性死亡的主要原因。现已证实肺癌细胞及肺癌组织HnRNPB1表达明显增高。且HnRNPB1可与端粒重复序列结合,并参与端粒酶介导的端粒长度的维持,提示HnRNPB1可能通过调节端粒酶活性,维持端粒长度,使细胞持续分裂而永生化。hTERT是端粒酶的主要活性成分,其表达与肺癌端粒酶活性密切相关。本实验通过观察肺癌细胞A549HnRNPB1基因沉默前后hTERT活性的变化,及其与肺癌细胞A549凋亡的关系,为探讨HnRNPB1在肺癌发生发展中的分子机制提供实验依据。方法采用通过RNA干扰技术抑制HnRNPB1基因表达的肺癌细胞株A549为研究对象,并根据干扰的HnRNPB1基因不同的靶序列,将实验组分为四组(A、B、C、D组)。对照组为转染空质粒的A549细胞(E组)和未转染任何质粒的A549细胞(F组)。用流式细胞计数观察HnRNPB1SiRNA对肺癌细胞A549凋亡的影响;采用RT-PCR和免疫细胞化学的方法分别检测肺癌细胞A549 HnRNPB1基因沉默前后hTERT的mRNA和蛋白表达水平。结果(1)HnRNPB1对肺癌细胞A549周期和凋亡的影响:HnRNPB1SiRNA具有抑制肺癌细胞增殖、促进凋亡的作用,实验组凋亡率较对照组明显增加,分别为A组(19.2±1.25)%、B组(23.4±3.12)%、C组(24.0±2.28)%、D组(33.5+2.49)%,而对照组凋亡率仅(8.7±1.86)%、(9.1±2.21)%。且实验组S期细胞分别为A组(27.0±2.97)%、B组(25.4±3.65)%、C组(24.2±4.12)%、D组(19.6±3.56)%,较对照组明显减少;(2)HnRNPB1对肺癌细胞A549 HnRNPB1 mRNA的影响:RT-RCR结果显示:HnRNPB1 SiRNA能够降低肺癌细胞A549 HnRNPB mRNA的表达,在实验组HnRNPB mRNA的抑制率分别为:77.69%、74.37%、75.65%和83.04%;(3)HnRNPB1对肺癌细胞A549 hTERT mRNA表达的影响:RT-RCR结果显示:HnRNPB1 SiRNA能够降低肺癌细胞A549 hTERTmRNA的表达,在实验组hTERT mRNA的抑制率分别为88.67%、90.67%、91.33%、86.67%,而空质粒组hTERT mRNA表达未受抑制;(4)HnRNPB1对肺癌细胞A549 hTERT蛋白表达水平的影响:免疫细胞化学结果显示,各实验组hTERT蛋白阳性表达率较对照组明显降低,有统计学意义,提示HnRNPB1 SiRNA能够降低hTERT蛋白的表达;(5)相关性分析提示HnRNP B1 mRNA的表达和hTERT mRNA的表达成明显的正相关,而HnRNP B1 mRNA和hTERT mRNA的表达与细胞凋亡率成负相关。结论(1)HnRNPB1 SiRNA能特异性抑制肺癌A549细胞HnRNP B1基因表达;(2)HnRNPB1 SiRNA能够促进肺癌细胞A549凋亡,抑制其增殖:(3)HnRNPB1 SiRNA能够抑制A549细胞hTERT mRNA及蛋白水平的表达;(4)HnRNP B1可通过调节hTERT活性参与肺癌细胞的增殖和凋亡的调节。
其他文献
研究背景膀胱肿瘤的发生发展是多阶段性、多基因参与、多种转录因子调控的过程,涉及一系列病理生理反应,包括细胞异常的增殖、粘附、运动、细胞外基质降解以及血管生成等。文
专利权质押为中小企业融资难开辟了新的途径。但也面临专利权稳定性差,价值波动大,专利权处置不易等难题,导致专利权质押融资具有较大的风险,降低了金融机构的贷款意愿,有鉴
目的:M蛋白(matrix protein)是水疱口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)的最重要的结构功能蛋白,它可抑制宿主基因的表达、使宿主细胞变圆、在缺少病毒其他成分的情况下直
针对人口密集场所,火灾隐患加剧的实际,小型、高效、廉价的烟雾检测系统越来越受到人们的重视。本设计以Arduino UNO-R3单片机为核心,通过MQ-2烟雾传感器检测外部环境,并使用
随着经济的快速发展,促进了城市化进程。人们的生活水平越来越高,对城市空间要求具有视觉美感及显现城市品质,而公共艺术作为一种城市公共空间表现形式,需要艺术家们通过以城
胶原蛋白或称胶原是动物体内含量最丰富的蛋白质 ,在动物体内起支持、保护、连接等多种作用。目前 ,胶原已广泛应用于医学医药工业、食品工业、日用化学品工业、生物合成及胶
化工生产水平的提高,有更多化工工艺均得到了更新,相应的生产设备也不断替换成最新型号,对进一步提高化工企业生产经济发展水平具有重要意义。其中超滤技术作为一种新型技术
目的研究白血病造血干细胞移植前后不同阶段的MRI表现特征。方法本研究共共40例。正常对照组15例,移植后未复发组共21例,移植后复发组4例。所有病例均行骨盆、股骨干和腰椎MR
综观当前的教师培训,方式比较雷同,一般是专家讲座,专家与一线培训学员面对面交流,围绕一个专题,培训学员们开展论坛活动,同课异构,上课、评课、议课,写写作业,培训结束时每
目的探讨银杏叶提取物(Extract of Ginkgo biloba,EGb)在2型糖尿病大鼠模型中预防动脉粥样硬化的作用。方法SD健康雄性大鼠30只,随机分为3组,分别为对照组,银杏叶提取物100mg